LMT光度計(jì)P30SCO

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分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析,。常用的波長范圍為：(1)200～380nm的紫外光區(qū)，(2)380～780nm的可見光區(qū),，(3)2.5～25μm（按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū),。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）,、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì),。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器

儀器組成

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器,。常用于核酸,，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源,、單色器,、樣品室、檢測器,、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成,。

光譜范圍

包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源,。

鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙,，黃綠，藍(lán)靛,，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源,。

分光光度計(jì)圖片(4張)

氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計(jì)的光源。

物質(zhì)的吸收光譜：

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,，它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì),。

當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過的光的強(qiáng)度減弱,，因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚ⅲ徊糠止獗唤M成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過溶液,。

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光,。

如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的損失則：

入射光 = 吸收光 十 透過光

分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,，通過系列分光裝置,，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后,，部分光線被吸收,，計(jì)算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比,。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí),，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度,；

I0為入射的單色光強(qiáng)度；

I 為透射的單色光強(qiáng)度,；

T 為物質(zhì)的透射率,；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質(zhì)的光程,，即比色皿的邊長,；

c 為物質(zhì)的濃度；

物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長,，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù),。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量,。在可見光區(qū),，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析,。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作,。

儀器特點(diǎn)

　　*的雙光路,、雙光束光學(xué)系統(tǒng)，儀器分辨率更高,，雜散光更低,，穩(wěn)定性、可靠性更強(qiáng),，分析更加準(zhǔn)確,；
　　采用320*240位點(diǎn)陣式高亮6 ”液晶顯示器，顯示清晰,，信息完備,；
　　*的長光程光路設(shè)計(jì)，使儀器分辨率更高,，尤其適合微量測試 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能,，使測試結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，用戶編輯更為簡單快捷,；
　　采用懸架式光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì),，整體光路獨(dú)立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上,，底板的變形和外界的震動(dòng)對(duì)光學(xué)系統(tǒng)不產(chǎn)生任何影響，從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性,；
　　采用同步正弦機(jī)構(gòu),，波長準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好,；
　　采用ARM系統(tǒng),；
　　0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動(dòng)可選，滿足不同用戶的測量需求,；
　　24位高速,、高精度A/D轉(zhuǎn)換，儀器精度更高,、反應(yīng)速度更快,；
　　主要元件采用進(jìn)口配置，使儀器雜散光更低,、穩(wěn)定性,、可靠性更強(qiáng)；
　　功能更加強(qiáng)大,，主機(jī)可獨(dú)立完成光度測量,、定量測量、光譜掃描,、動(dòng)力學(xué),、DNA/蛋白質(zhì)測試，多波長測試及數(shù)據(jù)打印等功能,；
　　充分考慮不同用戶的使用習(xí)慣,，本系列儀器都標(biāo)配元析公司光譜掃描軟件，聯(lián)機(jī)操作時(shí),，除能實(shí)現(xiàn)主機(jī)的所有測試功能外,，還可實(shí)現(xiàn)更為強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，并且使數(shù)據(jù)存儲(chǔ)達(dá)到無限,。

儀器指標(biāo)

型號(hào)UV-9000波長范圍190-900nm,；光譜帶寬0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六檔可選波長，準(zhǔn)確度±0.1nm（D2 656.1nm）,、 ±0.3nm,；全區(qū)域波長重復(fù)性≤0.1nm。

光度準(zhǔn)確度：±0.2%T

光度重復(fù)性：≤0.1%T

雜散光：≤0.01%T

穩(wěn)定性：±0.0004A/h（500nm處）

基線平直度：±0.001A

噪聲水平： ±0.0004A/h

光度范圍：0-200%T

電源：AC 220V/50Hz或110V/60Hz

重量：30kg

技術(shù)參數(shù)：

波長范圍：320∽1000nm

光譜帶寬：4nm

雜散光：≤0.5%（在360nm處）

波長準(zhǔn)確度：優(yōu)于±2nm

透射比準(zhǔn)確度：≤±1nmT

常見用途

核酸的定量

核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率功能,?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈,、雙鏈DNA,，以及RNA,。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù),。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA,，30μg/ml的Olig,。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。測試前，選擇正確的程序,，輸入原液和稀釋液的體積,，爾后測試空白液和樣品液。然而,，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順,。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大,。

事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%（1A）,。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng),，都是正常的。另外,，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等：在測試時(shí)，離子濃度太高,，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE,，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,，尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對(duì)測試結(jié)果的影響,，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值在0.1-1.5A,。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物,，否則讀數(shù)漂移劇烈,；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大,；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇*,；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個(gè)操作事項(xiàng),。

除了核酸濃度,，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值,，用于評(píng)估樣品的純度,，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）,。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子,。純樣品,，A320一般是0