日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

操作說明：

1,、取一支無菌的1.5mlEP管，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3µg,，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴,，重復(fù)一次)，100µl冰上融化的AH109感受態(tài)細(xì)胞,，PEG/LiAc500µl,，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次； 

2,、30℃水浴30min,，每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3,、每支加入20µl的二甲基亞砜,；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）

4,、42℃水浴15min,，每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

5,、12000rpm瞬時(shí)離心棄上清,，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復(fù)蘇1h,；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）

6,、12000rpm瞬時(shí)離心棄上清,，用100µl0.9%NaCl重懸，涂板,，30℃培養(yǎng)48-96h,。

注意事項(xiàng)：

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化,。

2,、若使用pYES2質(zhì)粒表達(dá)蛋白，需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖（篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖,；當(dāng)需要目的蛋白表達(dá)時(shí),，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá),。

3,、轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量,。

4,、同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。

5,、酵母為真核生物,，不易長期保存，隨感受態(tài)在-80℃保存時(shí)間的延長,，轉(zhuǎn)化效率會(huì)不斷下降,，建議保存時(shí)間不超過90天。

6,、BY4742酵母菌株對(duì)高溫敏感,，適生長溫度為27-30℃；高于31℃,，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降,。

7、酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢,，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢,，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃,，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,；涂SD單缺平板29℃,，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,，涂SD三缺或四缺平板平板29℃,，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。