發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物,。
操作說(shuō)明：
一：0.1cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分,，正置5分鐘,，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,，壓實(shí)冰面,，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫,。
二：取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,，待其融化，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul,，最好用試劑盒抽提,，雙蒸水溶解；轉(zhuǎn)化效率較高,，第一次使用前最好做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量）,，用手bo打管底混勻，立即插入冰中,，用200μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用,。
三：?jiǎn)?dòng)電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置參數(shù)：C=25μF，PC=200ohm,，V=2400V（此參數(shù)為Biorad推薦,，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出,，吸水紙吸干外表面水份,，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動(dòng)電擊,，電擊完成快速插入冰中,，加入1ml無(wú)抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí),。
四：6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上,，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天,。
會(huì)員.png)
4
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)