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蛋白質(zhì)-細(xì)胞相互作用實(shí)時(shí)定量分析系統(tǒng)

品牌介紹：

研發(fā)團(tuán)隊(duì)
十年前,，烏普薩拉大學(xué)研發(fā)團(tuán)隊(duì)發(fā)明了SPR技術(shù)，現(xiàn)已成為大分子相互作用研究的*,。2011年該團(tuán)隊(duì)LigandTracer Green的發(fā)布,，*實(shí)現(xiàn)了以熒光標(biāo)記檢測(cè)方法在細(xì)胞和組織水平上進(jìn)行實(shí)時(shí)蛋白互作研究，為藥物研發(fā),、腫瘤研究,、病毒研究及蛋白質(zhì)組學(xué)提供強(qiáng)大可靠的實(shí)時(shí)分析數(shù)據(jù)。LigandTracer系列產(chǎn)品成為目前*專業(yè)的蛋白-細(xì)胞相互作用實(shí)時(shí)分析系統(tǒng),，相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)表于Nature以及病毒學(xué),、核醫(yī)學(xué)的*期刊。

Ligandtracer產(chǎn)品系列：

Ligandtracer Green：可滿足幾乎所有實(shí)驗(yàn)室研究要求,，采用便捷的熒光標(biāo)記檢測(cè)

Ligandtracer Grey：為使用¹²⁵I標(biāo)記的同位素實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

Ligandtracer Yellow：為使用¹¹¹In,¹⁷⁷Lu,¹⁸F, ¹¹C ¹³¹I和類似標(biāo)記的同位素實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

Ligandtracer White：為使用¹⁴C, ³⁵S, ³²P, ³³P ,¹³¹I和正電子放射體 (比如 ¹⁸F)標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

蛋白質(zhì)-細(xì)胞相互作用實(shí)時(shí)定量分析系統(tǒng)

產(chǎn)品說(shuō)明：

Ligandtracer應(yīng)用

蛋白質(zhì)是生命功能的主要執(zhí)行者,，許多蛋白質(zhì)的功能發(fā)揮是通過(guò)蛋白質(zhì)相互作用實(shí)現(xiàn)的。人類細(xì)胞中約有7000種蛋白質(zhì),，其中30%在細(xì)胞膜上,，控制細(xì)胞分子運(yùn)作機(jī)制的信號(hào)有60%-70%由這些膜蛋白產(chǎn)生，但膜蛋白很難提純,，現(xiàn)有的檢測(cè)大多是將膜蛋白從其所處環(huán)境中分離,，這些方法不僅昂貴耗時(shí)，還可能會(huì)影響目標(biāo)膜蛋白的功能,。此外,，蛋白互作是非共價(jià)結(jié)合的動(dòng)態(tài)過(guò)程，有相互作用往往很弱,，不易檢測(cè)到,，甚至有些蛋白結(jié)合或解離的時(shí)間很短，使常規(guī)的檢測(cè)方法受限,。

親和力是生物分子反應(yīng)達(dá)到平衡（穩(wěn)態(tài)）時(shí)的理論,，它反映結(jié)合的強(qiáng)度。動(dòng)力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達(dá)到穩(wěn)態(tài)的,，反映結(jié)合的快慢,。有些配體受體互作有相同的親和力，卻顯示不同的動(dòng)力學(xué),。這些動(dòng)力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會(huì)更加有用,，

LigandTracer為科學(xué)家提供了一個(gè)無(wú)需分離膜蛋白,、在細(xì)胞水平上即可檢測(cè)蛋白功能的平臺(tái)，此外它還能在組織或蛋白水平檢測(cè)靶蛋白質(zhì)和其他多種生物分子之間的相互作用,，并進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)和親和力研究。LigandTracer是*可以實(shí)時(shí)定量蛋白細(xì)胞互作的系統(tǒng),，也是*實(shí)現(xiàn)定
量細(xì)胞表面受體數(shù)量的系統(tǒng),。

LigandTracer系統(tǒng)應(yīng)用于配基-受體的相互作用、抗原-抗體相互作用的免疫學(xué),、蛋白質(zhì)組學(xué),、醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā)和篩選,、疾病治療等研究,，涵蓋了蛋白-蛋白互作、蛋白-細(xì)胞/組織切片互作,、病毒-細(xì)胞互作,、藥物分子-細(xì)胞互作、細(xì)菌-細(xì)胞的結(jié)合,。
﹡動(dòng)力學(xué)分析：抗體特異性,、抗體與細(xì)胞的親和力、抗體的親和-解離速率（Kd常數(shù)）,、抗體的結(jié)合濃度
﹡細(xì)胞表面受體定量
﹡抗體評(píng)價(jià)：親和力及特異性測(cè)定
﹡藥物研發(fā)：EC50,、Emax，細(xì)胞周期研究中同步化的檢測(cè)（同位素標(biāo)記）
﹡疾病治療：癌分子靶向治療藥物療效監(jiān)測(cè),，抗輻射條件下DNA的合成與修復(fù)

Ligandtracer功能

親和力和動(dòng)力學(xué)測(cè)定

LigandTracer可以實(shí)時(shí)檢測(cè)蛋白互作過(guò)程,，因此即使對(duì)有相同的親和力但結(jié)合解離不同的動(dòng)力學(xué)過(guò)程也能捕獲準(zhǔn)確信息。通過(guò)比較不同濃度標(biāo)記蛋白的信號(hào)峰值可計(jì)算細(xì)胞和蛋白相互作用的親和力大小,。另外通過(guò)吸附與截留實(shí)驗(yàn),，可以檢測(cè)蛋白結(jié)合解離過(guò)程，得到其動(dòng)力學(xué)參數(shù),。

三種不同濃度標(biāo)記配體與受體結(jié)合,，平滑曲線代表了與之匹配的互作類型

高親和力結(jié)合的孵育時(shí)間的確定

對(duì)于高親和力抗體尤其一些治療藥物如 K_D <1 nM，常規(guī)方法所用孵育時(shí)間往往達(dá)不到假定的反應(yīng)平衡而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確,。而LigandTracer實(shí)時(shí)捕獲結(jié)合解離信息,，不再依賴于反應(yīng)達(dá)到平衡，大大降低了實(shí)驗(yàn)的盲目性和不確定性,，避免了錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

LT Green檢測(cè)FITC標(biāo)記pertuzumab與SKOV3細(xì)胞HER2受體結(jié)合，Alexa Fluor ® 488標(biāo)記cetuximab 與U343細(xì)胞EGFR結(jié)合,。結(jié)果：即使抗體濃度達(dá)到4.4 nM,，遠(yuǎn)高于其相應(yīng)K_D,，反應(yīng)達(dá)到平衡均超過(guò)20h。這二種抗原抗體的結(jié)合均表現(xiàn)出*的親和力,，如果僅單獨(dú)研究親和力無(wú)法獲知反應(yīng)達(dá)到平衡的時(shí)間,。

Antibody-antigen interactions: What is the required time to equilibrium?Andersson K etc., Nature Preceedings (2010) 

LigandTracer Green

熒光標(biāo)記檢測(cè)，對(duì)FITC標(biāo)記的化合物或其它具有相同激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的熒光標(biāo)記物進(jìn)行實(shí)時(shí)觀察,。

可選擇的檢測(cè)器：

*藍(lán)色（488nm）-綠色（535nm）FITC和其它類似熒光標(biāo)記

*黃色（590nm）-紅色（632nm）TexasRed和其它類似熒光標(biāo)記

*紅色（632nm）-近紅外（670nm）Alexa Fluor和其它類似熒光標(biāo)記

應(yīng)用

相同的親和力,，不同的動(dòng)力學(xué)

親和力是生物分子反應(yīng)達(dá)到平衡（穩(wěn)態(tài)）時(shí)的理論，它反映結(jié)合的強(qiáng)度,。動(dòng)力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達(dá)到穩(wěn)態(tài)的,，反映結(jié)合的快慢。

LigandTracer實(shí)時(shí)反映動(dòng)力學(xué)互作全過(guò)程,，相同的親和力,，卻有二種不同結(jié)合解離的動(dòng)力學(xué)過(guò)程。這是傳統(tǒng)終點(diǎn)飽和法無(wú)法獲知的,。對(duì)于fast on- fast off類型的蛋白互作來(lái)說(shuō),，它可能在短時(shí)間內(nèi)即達(dá)到平衡后不久開始解離，但若孵育時(shí)間長(zhǎng)可能會(huì)在洗脫過(guò)程之前就開始解離,、當(dāng)洗脫后可能已全部解離,，終點(diǎn)法測(cè)定會(huì)誤以為根本沒有結(jié)合；而對(duì)slow on- slow off類型來(lái)說(shuō),，為達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡往往需要數(shù)小時(shí)甚至數(shù)天,，但因曲線趨勢(shì)變化很微弱，往往會(huì)被誤以為已經(jīng)達(dá)到平衡,；如果單獨(dú)靠進(jìn)一步延長(zhǎng)孵育時(shí)間,，又存在抗體蛋白被細(xì)胞代謝掉的危險(xiǎn)，從而結(jié)果也不準(zhǔn)確,。這些動(dòng)力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會(huì)更加有用,，

參考文獻(xiàn)