培養(yǎng)基分裝是供微生物生長,、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料,。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型,,對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實驗和研究的目的不同,,所以培養(yǎng)基的種類很多,,使用的原料也各有差異,但從營養(yǎng)角度分析,,培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源,、氮源、無機鹽,、生長素以及水分等,。另外,培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值,、一定的緩沖能力,、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓,。瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),,是應用廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98~100℃下融化,,于45℃以下凝固,。但多次反復融化,其凝固性降低,。任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應及時滅菌,,以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌,。
培養(yǎng)基分裝滅菌操作方法和注意事項:
加水:打開滅菌鍋蓋,,向鍋內(nèi)加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水,,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存,。注意水要加夠,防止滅菌過程中干鍋,。
裝料,、加蓋:滅菌材料放好后,,關閉滅菌器蓋,采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,,使蒸汽鍋密閉,,勿使漏氣。
排氣:打開排氣口(也叫放氣閥),。用電爐加熱,,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,,當有大量蒸汽排出時,,維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣排凈,。
升壓,、保壓和降壓:當鍋內(nèi)冷空氣排凈時,即可關閉排氣閥,,壓力開始上升,。當壓力上升至所需壓力時,控制電壓以維持恒溫,,并開始計算滅菌時間,,待時間達到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,,停止加熱,,待壓力降至接近“0”時,打開放氣閥,。注意不能過早過急地排氣,,否則會由于瓶內(nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶內(nèi)液體沖出容器之外。
滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng):滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,經(jīng)24h培養(yǎng)無菌生長,,可保存?zhèn)溆茫恍泵媾囵B(yǎng)基取出后,,立即擺成斜面后空白培養(yǎng),;半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養(yǎng),。
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