微生物實驗室zui少不了的實驗儀器之一就是滅菌器,，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器,。GB 4789.1-2016中要求：實驗設備應定期進行檢查和/或檢定（加貼標志）、維護和保養(yǎng),，以確保工作性能和操作安全,。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢,？如果要做類似的驗證，又需要怎么做呢,？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關內容,。
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法,、自制測溫管法和生物指示劑法,，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求,。我們可以根據(jù)自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證,。
化學指示劑法
原理：化學指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形,，根據(jù)這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數(shù),。
一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果,。它是由熱敏化學物質與顯色劑及漆輔料制成油墨,，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外,，長度不低于5cm,，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后,，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會*變黑,，成為黑色線條；如變色不均勻或不*,，可認為該包裹不符合滅菌條件,。
留點溫度計法
原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似,，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的zui高溫度,。
驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部,，滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致,。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求,，因此是滅菌器驗證的zui低標準,。
自制測溫管法
原理：利用一些化學藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性,，把化學藥品密封在小玻璃管內,，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標,。
常用的試劑是苯甲酸,，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合,，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內放進滅菌器,，滅菌結束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同,，也只能指示滅菌時的溫度,，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
生物指示劑法
原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌,，來測定熱力滅菌的效果,。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似,，以此為指示菌,，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。
生物指示劑分為三種：芽孢懸液,、芽胞菌片,、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前,、中,、后和上層、中層的中央點,。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中,，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清,、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死,，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁,，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格,。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此,。
目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同,，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管,，將指示管放在滅菌容器內的各個點上，高壓滅菌后,，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎,，培養(yǎng)液從內部的小管中被放出，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照,。若是滅菌器滅菌效果不合格,，指示管內的芽孢復活后生長會改變肉湯的顏色是肉湯變?yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長,，肉湯仍舊是原來的紫色,。
對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關標準嚴格的要求驗證的頻次,，但是實驗室應當自行制定驗證頻次規(guī)定,，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結論兩個方面出發(fā),，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管,，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證,。小編以前工作的實驗室內部就要求指示膠帶驗證需要每批都做,，并且每月使用生物指示管驗證一次。
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