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發(fā)酵罐在滅菌的時候需要注意什么
閱讀：471 發(fā)布時間：2018-7-1發(fā)酵罐在滅菌的時候需要注意什么
發(fā)酵罐操作與滅菌技術(shù) 常用的滅菌技術(shù)一般分為,；物理滅菌和化學(xué)滅菌,。物理滅菌又包括濕熱滅菌、干熱滅菌,、射線滅菌法和過濾滅菌等,。而化學(xué)滅菌主要是使用化學(xué)試劑（如甲醛、苯酚,、新潔爾滅,、過氧乙酸,、高錳酸鉀等）進(jìn)行某些容器或物料以及無菌區(qū)域的滅菌。在生物發(fā)酵方面,，常用的設(shè)備是機(jī)械攪拌式發(fā)酵,，其殺菌效果的好壞直接影響到發(fā)酵是否能正常進(jìn)行。由于工業(yè)操作的特點(diǎn),，發(fā)酵罐滅 菌普遍采用濕熱滅菌法,。 一．小型發(fā)酵罐操作和酵母菌培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)室所使用的小型通氣攪拌發(fā)酵罐具有體積小，耗電少,，不宜染菌,，單位時間、單位體積的生產(chǎn)力高,，代謝放出熱量易于移去,，操作控制和維修方便等特點(diǎn)，因此能較好的滿足微生物的生長和代謝的需要,。 1.設(shè)備和材料 1L發(fā)酵罐,、5L發(fā)酵罐、50L發(fā)酵罐,、一套空氣除菌系統(tǒng),、供檢查無菌用的肉湯培養(yǎng)基和裝置。 2.發(fā)酵罐操作步驟 2.1發(fā)酵罐的清洗 發(fā)酵罐使用前后都應(yīng)認(rèn)真清洗,，特別是前后兩次培養(yǎng)采用不同的菌株時,，更應(yīng)注意清洗和殺菌工作。 發(fā)酵罐內(nèi)可進(jìn)行清洗的任何部分都應(yīng)認(rèn)真清洗,，否則都可能成為雜菌的滋生地,。易被忽略而不能充分清洗的地方有噴嘴角內(nèi)部與取樣管內(nèi)以及罐頂?shù)忍帯?2.2 種子培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 蛋白胨10g，葡萄糖40g,，蒸餾水100ml,，pH自然。500ml三角瓶裝液量100ml,，115℃,，滅菌20min。 培養(yǎng)條件：用接種環(huán)從保存斜面中接一環(huán)至三角瓶中,，150r/min,，28℃，搖瓶培養(yǎng)48h,。 2.3 發(fā)酵罐的組裝工作 ① 連接好冷卻水管。若采用自來水冷卻,，連接部要充分牢固,，并且注意連接管管徑與自來水管管徑一致,，盡可能采用耐壓管。 ②由于通入的空氣有一定壓力,，應(yīng)注意連接壓縮空氣的管子應(yīng)能承受一定壓力,。
③安裝pH及溶解氧等檢測裝置，注意各接線口不要出現(xiàn)差錯,。由于操作過程要和水打交道,，故線路連接一定要注意安全，要特別注意防止漏電,。 2.4 發(fā)酵罐滅菌 ① 排氣管為玻璃管,，內(nèi)裝有棉花，以保證蒸汽能自由出入發(fā)酵罐,，同時不會出現(xiàn)染菌現(xiàn)象,。 ② 取樣口上連接一段硅膠管，在硅膠管上安裝節(jié)流夾,，以防止培養(yǎng)基在滅菌是流出,。 ③ 裝入發(fā)酵罐溶積60%的培養(yǎng)基（成分同種子培養(yǎng)基）后，將發(fā)酵罐放入滅菌釜內(nèi),，在115℃下,，滅菌20min。當(dāng)滅菌完成后,，溫度降到60℃以下時,，打開滅菌釜，確認(rèn)發(fā)酵罐上所連接的管路完好后,，將罐去除,。盡快將通氣管接好，確認(rèn)排氣口正常后,，以0.3-0.5L/min通入空氣,。接通冷卻水管路，開攪拌在低速下進(jìn)行培養(yǎng)基的冷卻,。 2.5 取樣與分析方法 自培養(yǎng)操作開始起,，每3h取一次樣。取樣時,，將取樣管口流出的初15ml左右培養(yǎng)液作為廢液,，取隨后流出的培養(yǎng)液10ml，在OD505下測定吸光度,。所得數(shù)值基于已制得的菌體量與吸光度之間的曲線,，換算出菌體濃度。 二 發(fā)酵菌的空消技術(shù) 1 發(fā)酵罐的清洗 打開罐底排污閥,，用冷水沖洗罐壁,，如壁內(nèi)壁有沉積物,，操作人員必須下罐進(jìn)行人工鏟除，否則易包藏雜菌成為污染源,。進(jìn)罐清洗必須兩人進(jìn)行,，一人進(jìn)罐清洗，一人在外監(jiān)護(hù),。同時與罐體相連的取樣管道,，進(jìn)料管道，排污管道及有關(guān)閥門都要通水沖洗干凈,，通以沸水,，以提高洗滌效率，洗完后蓋上入孔蓋,。 ① 發(fā)酵罐空消操作 ② 打開罐頂各排汽閥,，開三路進(jìn)汽（罐底、風(fēng)管,、取樣管）,。 ③ 開始時，蒸汽以下進(jìn)上出為主,，蒸汽由罐底和風(fēng)管進(jìn)入,，由罐頂所有排汽閥排出冷空氣。在蒸汽排出時,，即關(guān)閉各閥門,，稍開排汽閥，當(dāng)罐壓上升到1.5-2.5kgf/cm2(1kgf/cm2=98.0665kpa)時,，開罐頂各排汽閥,，排汽歷時 15-20min，蒸汽改為上進(jìn)下出為主,，即關(guān)閉底部蒸汽閥,，關(guān)小進(jìn)風(fēng)管汽閥，蒸汽主要從取樣管進(jìn),，連消進(jìn)料管進(jìn)入,，空消過程中蒸汽應(yīng)將兩只大罐間倒種管道、壓料進(jìn)風(fēng)管道,、接種管道以及各排汽閥打開,，排汽消毒（兩個沖視鏡閥開啟短暫時間即可）。
