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液相色譜儀怎么使用,？
閱讀：214 發(fā)布時間：2025-6-14液相色譜儀怎么使用？
流動相配制：根據(jù)實驗需求選擇合適的流動相（如甲醇 - 水體系,、乙腈 - 緩沖鹽溶液），使用高純度試劑和超純水配制,，并通過 0.45μm 濾膜過濾,，去除顆粒雜質(zhì)，防止堵塞色譜柱與管路,。配制后需進行超聲脫氣 15 - 30 分鐘,，避免氣泡進入系統(tǒng)影響基線穩(wěn)定性。
樣品處理：確保樣品溶解,，使用 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾,，去除不溶物；對于復(fù)雜基質(zhì)樣品（如生物組織提取物）,，需進行萃取,、凈化等前處理，防止雜質(zhì)污染色譜柱與檢測器,。
儀器檢查：確認輸液泵,、進樣器、檢測器等部件連接正常,；檢查儲液瓶中流動相余量充足,，廢液瓶空間足夠；查看色譜柱標簽信息,，確認其規(guī)格（如 C18、5μm,、250×4.6mm）與實驗需求匹配,，并確保柱溫箱溫度設(shè)定范圍符合色譜柱耐受條件。
系統(tǒng)沖洗：開機后,，使用低流速（如 0.3 - 0.5mL/min）的初始流動相沖洗系統(tǒng) 15 - 30 分鐘，排除管路中的氣泡與殘留雜質(zhì),；若更換流動相體系（如從水相切換至有機相）,，需使用中間過渡溶劑（如異丙醇）逐步置換，防止鹽析或相分離,。
梯度洗脫程序設(shè)定：根據(jù)樣品特性,，在工作站軟件中設(shè)置流動相比例變化梯度。例如,，反相色譜分離多組分化合物時,，可設(shè)定初始有機相比例為 20%，在 20 分鐘內(nèi)線性升至 80%,，以實現(xiàn)不同極性組分的有效分離,。
流速與溫度調(diào)節(jié)：一般情況下,，流速設(shè)置為 0.8 - 1.2mL/min；柱溫箱溫度設(shè)定為 25 - 40℃,，提高分離效率并降低基線噪音,。
檢測器參數(shù)調(diào)整：若使用紫外 - 可見分光檢測器（UV - Vis），需設(shè)定檢測波長（如檢測苯環(huán)類化合物常用 254nm）,；熒光檢測器（FLD）則需設(shè)置激發(fā)波長與發(fā)射波長,；質(zhì)譜檢測器（MS）需優(yōu)化離子源溫度、噴霧電壓等參數(shù),。
進樣操作：手動進樣時，使用專用微量注射器吸取適量樣品（通常為 1 - 10μL）,，通過六通閥進樣,；自動進樣器則需在軟件中設(shè)置進樣體積、進樣序列及樣品盤位置,，確保樣品瓶編號與軟件設(shè)置一致,。
運行監(jiān)測：進樣后，實時觀察色譜圖基線穩(wěn)定性,、峰形及保留時間,。若基線波動較大或出現(xiàn)鬼峰，需排查流動相污染,、色譜柱殘留或檢測器故障等問題,；若峰形拖尾或分叉，可能需調(diào)整流動相 pH 值,、更換色譜柱或優(yōu)化流速,。
重復(fù)測定：為保證數(shù)據(jù)可靠性，每個樣品建議重復(fù)測定 3 次,，計算峰面積或峰高的相對標準偏差（RSD）,，通常要求 RSD≤2%。
峰識別與積分：使用工作站軟件自動識別色譜峰,，調(diào)整積分參數(shù)（如斜率靈敏度、峰寬閾值）確保積分結(jié)果準確,；對于重疊峰,，可采用手動積分或優(yōu)化分離條件重新測定。
定性定量分析：通過比較樣品峰保留時間與標準物質(zhì)保留時間進行定性,；采用外標法,、內(nèi)標法或標準加入法，根據(jù)標準曲線計算樣品濃度,。
報告生成：導出分析數(shù)據(jù),，生成包含樣品信息,、分析條件、色譜圖及結(jié)果數(shù)據(jù)的檢測報告,，必要時附原始數(shù)據(jù)與譜圖,。
日常維護：分析結(jié)束后,，使用高比例有機相（如 90% 甲醇 - 水）沖洗色譜柱 30 - 60 分鐘,，去除殘留樣品與雜質(zhì)；關(guān)閉儀器前,，將流速降至 0,，依次關(guān)閉檢測器、輸液泵與工作站軟件,。
定期維護：每月更換流動相管路過濾白頭,，防止堵塞；每半年對輸液泵密封圈,、進樣器針頭等易損部件進行檢查與更換,；定期使用標準物質(zhì)驗證儀器性能（如保留時間重復(fù)性、峰面積重復(fù)性）,，確保儀器處于最佳工作狀態(tài),。
液相色譜儀的規(guī)范使用需兼顧操作細節(jié)與理論知識。通過嚴格遵循上述流程,，并結(jié)合具體實驗需求靈活調(diào)整參數(shù),，既能獲得可靠的分析結(jié)果，也能有效延長儀器使用壽命,，充分發(fā)揮其在科研與檢測領(lǐng)域的價值,。
