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高速離心機(jī)在細(xì)胞沉淀實(shí)驗(yàn)中扮演著重要角色,。
閱讀:737 發(fā)布時(shí)間:2023-12-8高速離心機(jī)在細(xì)胞沉淀實(shí)驗(yàn)中扮演著重要角色。
高速離心機(jī)在細(xì)胞沉淀實(shí)驗(yàn)中有以下應(yīng)用:
沉淀的進(jìn)一步分離,,如沉淀的病毒,、細(xì)菌、細(xì)胞等,。
細(xì)胞生物學(xué)研究中用于沉淀細(xì)胞碎片,、細(xì)胞膜和細(xì)胞核等成分。
分子生物學(xué)中用于純化蛋白質(zhì),、富集DNA或RNA等,。
在細(xì)胞沉淀實(shí)驗(yàn)中,高速離心機(jī)的使用方法通常包括以下步驟:
選擇合適的離心管和轉(zhuǎn)頭:根據(jù)需要分離的樣品量和離心力大小,,選擇合適的離心管和轉(zhuǎn)頭,。通常使用角式轉(zhuǎn)頭,用于收集微生物菌種細(xì)胞碎片,、大的細(xì)胞器以及一些沉淀物等,。
制備細(xì)胞沉淀:在離心管中加入所需的樣品,并使用高速離心機(jī)進(jìn)行離心,,收集細(xì)胞沉淀,。
洗滌細(xì)胞:如果需要進(jìn)行進(jìn)一步的洗滌,可以將離心管中的上清液倒掉,,加入洗滌液,,再次使用高速離心機(jī)進(jìn)行離心,以去除上清液中的雜質(zhì),。
收集細(xì)胞:將離心管中的細(xì)胞沉淀收集起來(lái),,可以進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
需要注意的是,,在使用高速離心機(jī)時(shí),,需要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,確保離心管平衡放置,,避免因不平衡而導(dǎo)致離心機(jī)損壞,。同時(shí),還需要根據(jù)具體情況選擇合適的轉(zhuǎn)速和時(shí)間,,避免過(guò)高的轉(zhuǎn)速和時(shí)間導(dǎo)致樣品分離不,,而轉(zhuǎn)速過(guò)低和時(shí)間過(guò)短則可能導(dǎo)致樣品分離不充分。
細(xì)胞沉淀實(shí)驗(yàn)的具體步驟如下:
收集細(xì)胞,,將細(xì)胞懸液收集于離心管中,。
加入適量的細(xì)胞IP裂解緩沖液,在冰上或4°C下裂解30分鐘,。
以12,,000g離心30分鐘,,取上清液。
取少量裂解液用于蛋白質(zhì)印跡分析,,在細(xì)胞裂解液中加入相應(yīng)抗體和蛋白A / G-珠,。
緩慢搖動(dòng)溶解,進(jìn)行免疫沉淀后,,在4°C下以3,,000 g離心5分鐘。
將蛋白A / G-珠子離心至試管底部,,小心地吸出上清液,。
用裂解蛋白A / G-珠子洗滌3-4次,最后加入15μl 2×SDS上樣緩沖液,,在沸水中煮10分鐘。
此外,,還需要根據(jù)具體情況選擇合適的轉(zhuǎn)速和時(shí)間,,避免過(guò)高的轉(zhuǎn)速和時(shí)間導(dǎo)致樣品分離不,而轉(zhuǎn)速過(guò)低和時(shí)間過(guò)短則可能導(dǎo)致樣品分離不充分,。