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通過(guò)PCR原理了解PCR儀的關(guān)鍵

PCR就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復(fù)制,。目前常用的技術(shù),，可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),，可以將PCR儀分為普通PCR儀,，梯度PCR儀，原位PCR儀,，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類(lèi),。那么如何通過(guò)PCR原理來(lái)了解PCR儀的關(guān)鍵呢，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀下文,！

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下,，以單鏈為模版,，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成新的單鏈，與模版配對(duì)成為雙鏈分子挎貝,。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,，并設(shè)計(jì)與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物,，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,，多次重復(fù)“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級(jí)數(shù)大量擴(kuò)增特定的基因,。

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該類(lèi)酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,，不需要每個(gè)循環(huán)加酶,，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,，并逐步應(yīng)用于臨床。

從PCR原理可以看出,，PCR儀的關(guān)鍵是升降溫的步驟,。