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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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詳細(xì)介紹
U-ProteinExpress蛋白純化原則
蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái),。每種蛋白間的大小、形狀,、電荷,、疏水性,、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來(lái)得到重組蛋白,。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段,。一般蛋白純化采用的方法為樹(shù)脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA,、RNA等分開(kāi),，由于此時(shí)樣本體積大、成分雜,，要求所用的樹(shù)脂高容量,、高流速、顆粒大,、粒徑分布寬．并可以迅速將蛋白與污染物分開(kāi),，必要時(shí)可加入相應(yīng)的保護(hù)劑（例如蛋白酶抑制劑），防止目的蛋白被降解,。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,，此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開(kāi)來(lái)，要用更小的樹(shù)脂顆粒以提高分辨率,，常用離子交換柱和疏水柱,，應(yīng)用時(shí)要綜合考慮樹(shù)脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素。選擇性指樹(shù)脂與目的蛋白結(jié)合的特異性,，柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹(shù)脂上集中洗脫的能力,，洗脫峰越窄，柱效越好,。僅有好的選擇性,，洗脫峰太寬，蛋白照樣不能有效分離,。
U-ProteinExpress重組抗體使制備人源化抗體和人源抗體成為可能,，而這是其他常規(guī)的多克隆或單克隆抗體制備方法所不可能做到的。主要包括四個(gè)方面的技術(shù)：抗體庫(kù)技術(shù),，包括組合抗體庫(kù),、噬菌體抗體庫(kù)、細(xì)菌和酵母展示的抗體庫(kù),、核糖體展示的抗體庫(kù)及其抗體庫(kù)的篩選技術(shù),；重組抗體基因的改造和表達(dá)，包括抗體親和力成熟,、抗體人源化改造和穩(wěn)定性改造,，以及抗體基因在原核、酵母,、昆蟲(chóng),、哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、植物及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中的表達(dá)；重組抗體效應(yīng)功能的提高,，涉及抗體與同位素,、藥物、毒素結(jié)合的"導(dǎo)向藥物",、雙特異性抗體,、抗體一酶融合蛋白、免疫細(xì)胞因子及細(xì)胞內(nèi)抗體,；抗體特異性分析和鑒定,，主要介紹抗體的分離和純化、抗體標(biāo)記技術(shù),、抗體親和力測(cè)定,、抗體的抗原表位分析、抗體基因測(cè)序和結(jié)構(gòu)模建,，以及常用的抗體鑒定技術(shù),，如ELISA、免疫組化,、FACS分析,、免疫沉淀和Westernblot等。
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