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Clodronate Liposomes如何使用的相關問題解答
閱讀：3091 發(fā)布時間：2019-4-92018年蘇州螞蟻淘生物科技有限公司正式成為Clodronate liposomes的授權(quán)代理商,，負責該公司巨噬細胞清除試劑在中國大陸的市場和銷售工作,，此前使用的是陳舊的資料,，今天螞蟻淘重新整理了一份Clodronate liposomes說明書,，以FAQS的形式展示如下：
1,、是否有可能在體外使用氯膦酸脂質(zhì)體清除巨噬細胞?
是的,，在體外消耗巨噬細胞是可能的，但請記住,，這種方法特別適用于“體內(nèi)”研究,。原因是Clodronate從死qu的巨噬細胞釋放或泄漏培養(yǎng)基中發(fā)布的脂質(zhì)體(依賴于介質(zhì)的組成)不能逃離媒介而Clodronate,一旦“體內(nèi)”發(fā)布,半衰期很短,由于其快速切除腎臟。游離氯膦酸鹽分子不容易進入細胞,，因為它們很難通過細胞膜(以及脂質(zhì)體磷脂雙層膜),。然而，如果它們留在周圍的培養(yǎng)基中,，它們可能會慢慢積累成細胞,。
參見參考文獻Claassen, I., Van Rooijen, N., and Claassen, E., 1990. A new method for removal of mononuclear phagocytes from heterogenous cell populations ‘in vitro’, using the liposome-mediated macrophage ‘suicide’ technique. J. Immunol. Meth.. vol. 134. pp. 153-161. (#32).
2、清除肺泡巨噬細胞如何給藥,？
脂質(zhì)體既可經(jīng)鼻給藥,，也可經(jīng)氣管給藥。
參見參考文獻：DeHaan, A., Groen, G., Prop, J., Van Rooijen, N., Wilschut, J. 1996. Mucosal immunoadjuvant activity of liposomes: Role of alveolar macrophages. Immunology, 89; 488-493)
The difference may be that all liposomes once admiNISTered intratracheally, arrive in the lung (alveoli), whereas liposomes admiNISTered intranasally (if admiNISTration is not well performed
3,、動物注射氯膦酸脂質(zhì)體后死亡的原因,？
A、動物在注射過程中死亡
這可能是由于注射了非均勻懸浮的脂質(zhì)體,。
為了得到均勻的懸浮體,，在注射前應搖動或攪拌脂質(zhì)體的懸浮體。一段時間后脂質(zhì)體會沉淀,。如果注射時間太長,，它們甚至可能沉淀在注射器中，如果更多的動物使用相同的注射器注射，這也可能導致不同的劑量,，因為個動物將得到更多的(部分沉淀)脂質(zhì)體比后一個動物,。
另一個原因可能是注射過快。如果從冰箱中取出脂質(zhì)體,，它們至少應該有時間達到室溫,。
B、動物在注射幾天之后死亡
這可能是由于微生物污染和/或在注射前不久或注射期間激活動物造成的,。請記住,，巨噬細胞的缺失可能導致病毒滴度、細菌或酵母菌的增加,。
4,、脂質(zhì)體標簽如何應用？
對照脂質(zhì)體可能被標記,，例如用熒光染料DiI,，因為它們不影響巨噬細胞。因此,，該標簽將顯示組織內(nèi)脂質(zhì)體的分布模式及其被巨噬細胞攝取,。我們通常不發(fā)送帶有DiI標記的氯膦酸脂質(zhì)體，原因如下:氯膦酸脂質(zhì)體會殺死巨噬細胞;因此,，一旦巨噬細胞死亡,，DiI標簽將被重新輻射，而該標簽不再代表脂質(zhì)體的實際分布,。因此,，脂質(zhì)體要么含有氯膦酸鹽來消耗巨噬細胞，要么含有DiI來顯示哪些巨噬細胞正在吞噬脂質(zhì)體(或者脂質(zhì)體是否能夠到達待研究的巨噬細胞),。組合可能導致誤解,。
材料：
PBS:磷酸0012;0,8% NaCl, pH 7,4
DiI的解決方案:
將1ml乙醇100%添加到2,5 mg DiI(分子探針文章編號D-3911)在35千赫的水浴中超聲1分鐘(嵴應溶解)
方法：
每毫升脂質(zhì)體懸浮液中加入10微升DiI溶液；
*搖動脂質(zhì)體懸浮液,；
室溫(黑暗)孵育10分鐘,；
以20.000 xG離心脂質(zhì)體10分鐘；
移除上層清液,；
加入無菌PBS,，復蘇；
以20.000 xG離心脂質(zhì)體10分鐘,；
將無菌PBS添加到原始卷中,；
在4攝氏度的溫度下儲存標記為黑色的脂質(zhì)體
5、
A1,。大鼠成熟巨噬細胞對ed1和ed2呈陽性,。然而，它們的前體沒有表現(xiàn)出吞噬作用(直接離開骨髓后)或很少的吞噬作用(在它們擴散到成熟巨噬細胞前不久)也是陽性的,。這些前驅(qū)體對e,。2是負的。因此,，ed2 +細胞會*耗盡,，但ed1 +細胞只會部分耗盡。ED1+消耗的百分比取決于前體/成熟巨噬細胞的實際比例,，由于新前體的補充,，可能在以后的時間間隔內(nèi)發(fā)生改變。
6,、失敗的表現(xiàn),？
請注意，氯膦酸酯脂質(zhì)體和對照脂質(zhì)體都是大批量生產(chǎn)的,。這些母批得到一個*的代碼,，并檢查氯膦酸鹽的含量和可能的污染后的準備。這些批次的樣品被送往世界各地的幾個(ca 30)不同的實驗室,。因此,，如果我們收到一封電子郵件，報告與脂質(zhì)體缺乏活性或污染有關的問題,，我們將檢查是否有其他來自實驗室的投訴,，這些實驗室確實收到了與發(fā)給您的樣品相同批次的樣品。如果沒有,，我們當然會盡快通知您未來的投訴將到達我們,。
它們失效的具體地理相關原因可能是運輸或儲存期間的溫度造成的。脂質(zhì)體在運輸或儲存過程中,，任何時候都不應冷凍或加熱至攝氏30度以上,。
此外，在選擇給藥途徑時,，應確保脂質(zhì)體能夠暢通無阻地接近即將耗盡的吞噬細胞(見參考資料一章),。請記住，脂質(zhì)體是顆粒,，不會穿過正常毛細血管內(nèi)皮,。
此外，巨噬細胞的特異性標記物也需要從組織中確定它們的消耗,。非特異性標記的使用可能影響結(jié)果的可靠性,。
7、如何處理氯膦酸脂質(zhì)體和控制脂質(zhì)體,？
氯膦酸脂質(zhì)體和對照脂質(zhì)體的懸浮液應按原樣使用,，不應稀釋或進行任何其他處理,。如果在到達后的幾天內(nèi)不使用，可以將其保存在攝氏4度,。從未凍結(jié)脂質(zhì)體! !
脂質(zhì)體(作為顆粒)容易沉淀,。因此，在將懸浮液分成更小的體積或注射到動物體內(nèi)之前,，應輕輕搖動懸浮液,，以便再次獲得均勻的懸浮液，并使脂質(zhì)體在整個懸浮液中均勻分布,。如果儲存在4攝氏度,，脂質(zhì)體應該有機會達到室溫之前注射。永遠不要注射冷脂質(zhì)體!
8,、增加氯膦酸脂質(zhì)體的濃度
A,、
不，氯膦酸鹽在脂質(zhì)體內(nèi)的水艙中的濃度受氯膦酸鹽溶解度的限制,，在標準的氯膦酸鹽脂質(zhì)體懸浮液中保持大濃度,。
B、
這是不推薦靜脈注射,，因為流動性會降低,，這可能導致堵塞毛細血管。然而,，它也可以嘗試,，例如在松散編織的組織中局部注射，或在脂質(zhì)體逐漸進入循環(huán)之前從脂質(zhì)體被過濾的腹腔內(nèi)注射,。
C,、如何確定用量？
靜脈注射每10克體重不應超過0.1毫升,。然而,，腹腔內(nèi)注射時，注射量可大大增加,。對于皮下注射,，大注射量取決于注射部位的儲存能力。
D,、
Clodronate體內(nèi)的半衰期是以來的15分鐘,是很有區(qū)別的注射高劑量的免費Clodronate,這將減少到一半的原始值每15分鐘,注射相同劑量的脂質(zhì)體將從死qu的巨噬細胞釋放緩慢,。
在種情況下，有一個高濃度,，將迅速減少,。在第二種情況下，濃度要低得多,，但可以維持更長的時間,。
9,、巨噬細胞的長期消耗
在正常情況下，即在沒有某些微生物產(chǎn)物激活的情況下,，巨噬細胞群,，如肝臟中的庫普弗細胞和脾臟中的紅髓巨噬細胞，在約1周后開始重新填充它們的隔室,。
其他巨噬細胞群，如脾臟邊緣嗜金屬巨噬細胞和邊緣區(qū)巨噬細胞(靜脈注射后)和淋巴結(jié)巨噬細胞(引流區(qū)皮下注射后)在較長時間內(nèi)都不存在(見相關文獻底稿),。
為了實現(xiàn)SCID小鼠巨噬細胞的長期耗竭,，F(xiàn)raser等人(Blood, 86;嘗試了幾種注射方案，其中,，一次未稀釋的氯丙酸脂質(zhì)體注射后,，隨后每5-7天稀釋一次氯丙酸脂質(zhì)體。
然而,，我們應該記住巨噬細胞調(diào)節(jié)各種非吞噬細胞的功能,。因此，它們的長期缺失可能終導致功能不活躍,，甚至這些非吞噬細胞的消失,。
10、巨噬細胞前體(單核細胞)
而靜脈注射Clodronate脂質(zhì)體沒有成熟的巨噬細胞如腸道,由于脂質(zhì)體不能跨毛細血管的血管內(nèi)皮,Galeazzi et al . (Am J. Physiol. 278 G259-G265, 2000, 見還在手稿)描述的影響通過靜脈注射Clodronate脂質(zhì)體的炎癥誘導招聘和滲透F4/80陽性細胞的小鼠空腸,。關于這個問題,，以下幾點很重要:巨噬細胞(單核細胞)的前體被招募到例如炎癥區(qū)域，循環(huán)中的氯膦酸脂質(zhì)體似乎耗盡了,。在這種情況下,，幾次注射氯膦酸脂質(zhì)體后不久，必須給予對方,，因為1,。脂質(zhì)體在循環(huán)中存活時間不長。相對于成熟的巨噬細胞,，新的單核細胞可以在較短的時間內(nèi)被招募,。在Galeazzi等人的研究中，給予氯膦酸酯脂質(zhì)體4小時,。在感染前,、感染后1、2,、4天內(nèi),，應保證盡可能多地消耗所招募的前體。-顯然,，他們得到了大量的,，在他們的情況下,，也有足夠的損耗，但幾乎*的損耗從來沒有報告過,。-在更多的研究中,，氯膦酸脂質(zhì)體的作用只能通過假設在循環(huán)或單核/內(nèi)皮相互作用水平上對巨噬細胞前體的作用來解釋。關于血腦屏障(BBB),，后者的作用可能是通過將甘露糖殘基摻入含脂質(zhì)體的氯膦酸鹽中來介導的,，Huitinga等(J. Exp. Med. 172; 1025-1033, 1990）描述了甘露醇酯類氯膦酸脂質(zhì)體在實驗性變應性腦脊髓炎(EAE)模型中的作用。——然而在Clodronate脂質(zhì)體的研究多次(每周2次)和靜脈注射給正常小鼠,成熟的巨噬細胞在各種器官血管障礙防止直接進入成熟的巨噬細胞,并沒有耗盡即使在一個月之后,強調(diào)單核細胞維持正常營業(yè)額招募巨噬細胞在這些器官,沒有受到明顯影響,。
請同時參閱新聞部分:
Blood monocytes (the precursors of mature resident macrophages) can be depleted by intravenous injection of Clodronate liposomes.
In: J. Immunol. 2004 Apr 1;172(7):4410-7.
Subpopulations of mouse blood monocytes differ in maturation stage and inflammatory response.
by: Sunderkotter C, Nikolic T, Dillon MJ, Van Rooijen N, Stehling M, Drevets DA, Leenen PJ.
11,、生產(chǎn)及裝運時間表？
訂單在周一,、周二和周四發(fā)貨,。通過電子郵件發(fā)送的采購訂單可能需要幾天的時間來處理。
在此之后收到的訂單早將于下周發(fā)貨,。盡管我們通常準備的脂質(zhì)體懸浮液比滿足所有要求所需的多一點,，但我們每周的生產(chǎn)計劃都是根據(jù)這些要求制定的。
如果你想確定脂質(zhì)體的存在,，當你在進行中的實驗中需要這些時,，你應該至少提前兩周訂購。更好的方法是在脂質(zhì)體已經(jīng)儲存在冰箱里的時候開始實驗,。雖然我們通常每周發(fā)貨,，但疾病或其他不可預見的情況可能會打斷這個過程!
如果您的訂單在 2周內(nèi)沒有到達，有兩個主要原因,。
1. 該包裹被您的組織拒絕,，因為您的名字不為內(nèi)部分發(fā)郵件的人所知，或者您的地址不完整,。
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