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免疫熒光單標(biāo)

服務(wù)簡介：
熒光免疫組織化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一,，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）

冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

1,、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫，晾干水分，冷丙酮固定10min,，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。

2,、 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),。中低火5min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),，切勿干片,。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。（修復(fù)液和修復(fù)強(qiáng)度根據(jù)組織來確定）

3,、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,，室溫封閉30min,。

4、 加一抗：輕輕甩掉封閉液,，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜,。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）

5,、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,，避光室溫孵育50min。

6,、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,，避光室溫孵育10min,。

7、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min,。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8,、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像,。（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555 nm；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）

石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

1,、 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗,。

2、 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH9.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),，切勿干片,。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定）

3,、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,，室溫封閉30min。

4,、 加一抗：輕輕甩掉封閉液,，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）

5,、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,，避光室溫孵育50min。

6,、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min,。

7,、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片,。

8、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像,。（紫外激發(fā)波長330-380nm,，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555 nm,；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）

茁彩生物（zcibio）專注于各種生物制劑,、標(biāo)準(zhǔn)品,、API及化合物庫，總部位于中國上海,，分別在國內(nèi)各個(gè)省份設(shè)置代理商,。Zcibio經(jīng)過不斷努力已經(jīng)研究出更多產(chǎn)品，包括旗下的流式抗體,，分子生物學(xué)試劑,，以及WB輔助試劑， 產(chǎn)品涵蓋癌癥,、神經(jīng)科學(xué),、抗感染、表觀遺傳學(xué)等20個(gè)熱門研究領(lǐng)域,。同時(shí)zcibio還擴(kuò)大了市場(chǎng)的外包服務(wù),，其中包括常用的HE然后，病例切片,，免疫組化以及TUNEL檢測(cè)，項(xiàng)目超過20種不同類型的試驗(yàn),，可滿足實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)的項(xiàng)目要求,。zcibio 對(duì)每批產(chǎn)品都進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，力求用科學(xué)的方法做科學(xué)產(chǎn)品,！,！

免疫熒光單標(biāo)