TUNEL（熒光）實(shí)驗(yàn)步驟1,、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來(lái)復(fù)溫,，晾干水分，冷丙酮固定10min,，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。

實(shí)驗(yàn)收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

TUNEL（熒光）服務(wù)介紹：

      晚期凋亡細(xì)胞中染色體DNA雙鏈或單鏈斷裂產(chǎn)生粘性3'-OH末端,，在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下,，將帶有熒光素分子的dUTP標(biāo)記到DNA的3'-末端，然后通過(guò)熒光顯微鏡觀察,、或進(jìn)而用帶有HRP的一抗染色后DAB顯色,，可以進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，該實(shí)驗(yàn)稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL),。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)流程：

　　冰凍切片tunel實(shí)驗(yàn)步驟：

        1,、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來(lái)復(fù)溫，晾干水分,，冷丙酮固定10min,，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。

        2,、 修復(fù)：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲(chǔ)存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織,，37度溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。

        3,、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。

        4,、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用）,，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi),，37℃恒溫孵育2小時(shí),，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。

        5,、 阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min,。切片放入用甲醇配制的3%過(guò)氧化|氫溶液（過(guò)氧化氫：甲醇=1:9）室溫避光孵育15 min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min,。

        6、 加試劑3：切片稍甩干后,，每張切片加適量試劑3(converter-POD）覆蓋組織,，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,，每次5min。

        7,、 DAB顯色：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為細(xì)胞核呈棕黃色,，自來(lái)水沖洗切片終止顯色,。

        8、 復(fù)染細(xì)胞核：Harris蘇木素復(fù)染3min左右,，自來(lái)水洗,，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水沖洗,，氨水返藍(lán),，流水沖洗。

        9,、 脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無(wú)水乙醇Ⅰ6min -無(wú)水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,，將切片從二甲苯拿出來(lái)稍晾干，中性樹膠封片,。