TUNEL（熒光）實驗步驟1、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復溫,，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

實驗收費標準：

TUNEL（熒光）服務介紹：

      晚期凋亡細胞中染色體DNA雙鏈或單鏈斷裂產(chǎn)生粘性3'-OH末端,，在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下,，將帶有熒光素分子的dUTP標記到DNA的3'-末端，然后通過熒光顯微鏡觀察,、或進而用帶有HRP的一抗染色后DAB顯色,，可以進行凋亡細胞的檢測，該實驗稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL),。

實驗結果展示：

實驗流程：

　　冰凍切片tunel實驗步驟：

        1、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復溫,，晾干水分,，冷丙酮固定10min,，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

        2,、 修復：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走）,，在圈內(nèi)滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織，37度溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min。

        3,、 破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育20min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

        4,、 加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現(xiàn)配現(xiàn)用），加到圈內(nèi)覆蓋組織,，切片平放于濕盒內(nèi),，37℃恒溫孵育2小時，濕盒內(nèi)加少量水保持濕度,。

        5,、 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。切片放入用甲醇配制的3%過氧化|氫溶液（過氧化氫：甲醇=1:9）室溫避光孵育15 min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

        6,、 加試劑3：切片稍甩干后,，每張切片加適量試劑3(converter-POD）覆蓋組織,，切片平放于濕盒內(nèi),，37℃溫箱孵育30min,。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,。

        7,、 DAB顯色：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時間,，陽性為細胞核呈棕黃色,，自來水沖洗切片終止顯色。

        8,、 復染細胞核：Harris蘇木素復染3min左右,，自來水洗，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,，自來水沖洗,，氨水返藍，流水沖洗,。

        9,、 脫水封片：將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min --無水乙醇Ⅰ6min -無水乙醇Ⅱ6min -二甲苯Ⅰ5min 中脫水透明,，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片,。