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神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸是人體內(nèi)的重要組成物質(zhì),，參與各種代謝途徑,，可通過調(diào)控中樞神經(jīng)元的興奮或抑制，參與神經(jīng)元信息傳遞,、認(rèn)知,、學(xué)習(xí)和記憶等過程。神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸主要有γ-氨基丁酸,、天冬氨酸和天冬酰胺等,，可分為興奮性和抑制性兩類，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸包括天冬氨酸等,，抑制性神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸包括 γ-氨基丁酸等,。γ-氨基丁酸參與調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)和記憶過程[8?9] ，γ-氨基丁酸還能改善睡眠和預(yù)防抑郁 ,，天冬氨酸與智能,、情緒和警覺性有關(guān)。天冬酰胺可通過天冬酰胺合酶由天冬氨酸合成,，該酶的缺陷會(huì)導(dǎo)致大腦結(jié)構(gòu)異常和認(rèn)知障礙,。

神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸不僅在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用，在非神經(jīng)系統(tǒng)中也有重要的生理意義,。γ-氨基丁酸能調(diào)節(jié)免疫,、保護(hù)和改善胰島功能。人類飲食不僅直接影響身體狀況,，也會(huì)影響大腦功能和精神狀態(tài),。食品是神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸的天然來源，飲食調(diào)整和補(bǔ)充在神經(jīng)疾病等許多疾病的治療中有積極的作用,。神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸廣泛存在于食品中,，其中黃豆、黑豆,、紅小豆和綠豆等豆類食品不僅含有豐富的神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸,，同時(shí)也是人們膳食中普遍常見且需要的部分。因此,，建立 黃豆、黑豆,、紅小豆和綠豆這 4 種豆類食品中神經(jīng)遞質(zhì)類氨基酸的檢測(cè)方法非常有必要,。

目前，氨基酸和神經(jīng)遞質(zhì)的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜（HPLC）法,、液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS） 法,、離子色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）法等,。其中,，液相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)氨基酸需要做柱前衍生化處理,，前處理過程復(fù)雜，而氨基酸自動(dòng)分析儀法耗時(shí)比較長(zhǎng),。

實(shí)驗(yàn)方法

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制　

分別稱取適量的天冬氨酸,、天冬酰胺和 γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品用超純水配制成 1 mg/mL 單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存于 4 ℃ 冰箱中,。取適量各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,，用超純水稀釋成 0.5 mg/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

液相色譜條件　

色譜柱：Agilent Zorbax SB-Aq RRHT（3.0 mm×100 mm, 1.8 μm）,；柱溫：25 ℃；

流速：0.3 mL/min,；進(jìn)樣量：1 μL,。流動(dòng)相為：A 為 0.5 mmol/L 乙酸銨水溶液，B 為甲醇,；梯度洗脫程序：0~1 min, 30% B,；1~2 min，30%~90% B,；2~3 min,，90% B；3~4 min,，30% B,。

色譜柱的選擇　

分別使用 SB-C18（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm）、Zorbax SB-Aq RRHT（3.0 mm×100 mm, 1.8 μm）和 Eclipse Plus C18 RRHD（2.1 mm×100 mm, 1.8 μm）三種不同的色譜柱對(duì) 1 μg/mL 的天冬氨酸,、天冬酰胺和 γ-氨基丁酸混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè),，考察色譜柱對(duì)目標(biāo)化合物的分離效果及峰形的影響。

流動(dòng)相的優(yōu)化　

首先分別使用水-甲醇和水-乙腈作為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè),，考察對(duì)目標(biāo)化合物響應(yīng)強(qiáng)度的影響,，然后分別使用 0.1% 甲酸水溶液-甲醇、0.5 mmol/L 乙酸銨水溶液-甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè),，考察對(duì)目標(biāo)化合物分離度和峰形的影響,。

柱溫的選擇　

分別使用 20、25,、30,、35、40,、45 ℃ 柱溫進(jìn)行檢測(cè),，考察柱溫對(duì)目標(biāo)化合物響應(yīng)強(qiáng) 度的影響。

質(zhì)譜條件　

離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描方式：正離子掃描,；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）,；離子源溫度：550 ℃；離子化電壓：4500 V,；霧化氣（N2 ）壓力：55 psi,；氣簾氣（N2 ）壓力：35 psi；輔助加熱氣 （N2 ）為 55 psi,；

樣品前處理,，采用水作為溶劑，超聲提取目標(biāo)化合物,。分別稱取粉碎后過 60 目篩的黃豆,、黑豆、紅小豆和綠豆粉末 2.5 mg 于 1.5 mL 離心管中,，加入 1 mL 超純水,，渦旋混勻后，超聲提取 30 s,，以 13500 r/min 離心 10 min,，取上清液經(jīng) 0.22 μm 濾膜過濾，供 UPLC-MS/MS 分析,。