技術(shù)文章
超薄切片VS電鏡負(fù)染
閱讀:238 發(fā)布時(shí)間:2023-8-18負(fù)染技術(shù)首先由Hall(1955)等人所采用,在后來(lái)的生物學(xué)研究中得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用,。負(fù)染樣本不需經(jīng)過(guò)固定,、脫水、包埋和超薄切片等復(fù)雜操作,,而是直接對(duì)沉降的樣品勻漿懸浮液進(jìn)行染色,。

組織超薄切片的染色通常稱(chēng)為正染色,。在正染色時(shí),重金屬離子與大分子反應(yīng)增加了樣品結(jié)構(gòu)的電子密度,,使之在電鏡下觀察時(shí)呈黑色,,但背底未被染色,觀察時(shí)呈白色,,從而形成樣品圖像反差,。

負(fù)染又稱(chēng)陰性反差染色,它是利用高密度的,、且在透射電鏡下又不顯示結(jié)構(gòu)的重金屬鹽(如磷鎢酸,、醋酸鈾等),把生物標(biāo)本包圍起來(lái),、在黑暗的背景上顯示出呈現(xiàn)陰性反差樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu),。所以負(fù)染色所顯示的電鏡圖像,正好與超薄切片正染色相反,,其樣品結(jié)構(gòu)為透明淺色,,而背底則為無(wú)結(jié)構(gòu)的灰色或黑色。對(duì)于負(fù)染色的機(jī)制,,目前還不夠清楚,。在負(fù)染色中,樣品與染液之間不發(fā)生反應(yīng),,只是利用樣品染色劑密度的懸殊對(duì)比而將樣品襯托出來(lái),,故稱(chēng)負(fù)染色法。與超薄切片技術(shù)相比,,該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便,、用藥量極少、省時(shí)快速及分辨力高等優(yōu)點(diǎn),,現(xiàn)廣泛用于細(xì)菌,、病毒、大分子結(jié)構(gòu),、亞細(xì)胞碎片及分離的細(xì)胞器等研究工作,。特別是在病毒學(xué)領(lǐng)域,負(fù)染色更能發(fā)揮其獨(dú)到作用,,是一項(xiàng)很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),。