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茁彩生物通用的樣本處理方法
閱讀：460 發(fā)布時間：2020-9-3茁彩生物通用的樣本處理方法
土壤：
稱取1g土壤,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工將標本充分混勻,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,。
糞便：
稱取1g糞便,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標本充分混勻,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清。
咽拭子：
加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,，溶解咽拭子頭部,，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清。分裝一份待檢測,，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。如果是測分泌蛋白,，直接取上清檢測，測試細胞內蛋白,，要破碎細胞,。
植物標本(精提):
1、 稱取0.1g（誤差±3%以內）新鮮植物組織樣本,，在液氮中充分研磨,；
2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度過夜,；
3,、 于4度，8000rpm,，離心20分鐘,，取上清；
4,、 上清液過C-18固相萃取柱,。具體步驟是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%yimi（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,，保存?zhèn)溆茫?br />5,、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液（1ml定容）?；靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,，然后4度離心（8000rpm，15分鐘）,，取上清并暫時保存于4度待用,。植物標本(推薦):
用預冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)沖洗組織，去除殘留物質（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比,，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,，并做好記錄,。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融,。后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘,，取上清檢測。
牛奶：
用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
蜂蜜：
用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
培養(yǎng)的細胞:
A,、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融（如果反復凍融,，破碎效果不好，就采用超聲波破碎）,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
B,、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,，使細胞濃度達到100萬/ml左右，置于冰盒上,，用超聲破碎儀,，設置破碎2s，冷卻30s的方式,，充分破碎細胞,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
C,、組織的細胞切割標本后，稱取1g組織,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，去除上清,，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞,。
尿液：
用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
胸腹水：
用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
腦脊液：
用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,，仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
樣本收集注意事項:
1,、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
2,、標本采集后盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融。
3,、我們羅列的是通用的樣本處理方法,，無法涵蓋各種樣本,，對于一些特殊樣本，建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻,，自行設計合理的樣本處理方法,。