萬柏隔水式細(xì)胞復(fù)蘇儀是通過快速融化的手段保證細(xì)胞外結(jié)冰晶在很短時間內(nèi)融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞重新結(jié)晶對細(xì)胞造成損害，復(fù)蘇成功的細(xì)胞可以保持很高的活力,。
當(dāng)溫度進一步下降，細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰,，產(chǎn)生冰晶損傷,。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷,。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結(jié)合,，從而降低冰點,，減少冰晶的形成,，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷，細(xì)胞得以在超低溫條件下保存,。
在復(fù)蘇時,，一般以很快的速度升溫,，1-2 分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫,，細(xì)胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間,，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細(xì)胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能,。
冷凍保護劑對細(xì)胞的冷凍保護效果還與冷凍速率,、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣,。
冷凍保護體外培養(yǎng)物,，除了必須有最佳的冷凍速率、合適的冷凍保護劑和凍存溫度外,，在復(fù)蘇時也必須有最佳的復(fù)溫速率,，這樣才能保證最后獲得最佳冷凍保存效果。復(fù)溫速率是指在細(xì)胞復(fù)蘇時溫度升高的速度,。復(fù)溫速率不當(dāng)也會降低凍存細(xì)胞存活率,。一般來說，復(fù)溫速度越快越好,。常規(guī)的做法是，在 370C 水浴中,，于1-2分鐘內(nèi)完成復(fù)蘇,。復(fù)溫速度過慢，細(xì)胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細(xì)胞損傷,。復(fù)溫時造成的細(xì)胞損傷非?？欤跇O短的時間內(nèi)發(fā)生,。
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