菌株名稱:艱難梭菌(Clostridioides difficile)。
菌株編號(hào):GDMCC1.2602,,GDMCC 代表廣東省微生物菌種保藏中心,。
質(zhì)量控制:用于食品、藥品,、環(huán)境等領(lǐng)域中與艱難梭菌相關(guān)檢測(cè)的質(zhì)量控制,。可對(duì)檢測(cè)方法,、培養(yǎng)基,、試劑等進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估和驗(yàn)證,如驗(yàn)證培養(yǎng)基對(duì)艱難梭菌的生長(zhǎng)支持能力,、選擇性和特異性等,。
方法驗(yàn)證:在相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)方法的驗(yàn)證中,,作為標(biāo)準(zhǔn)菌株確認(rèn)檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和可靠性,包括增菌,、分離,、鑒定等環(huán)節(jié)能否有效檢出艱難梭菌。
實(shí)驗(yàn)室能力評(píng)估:幫助實(shí)驗(yàn)室評(píng)估自身的檢測(cè)能力和操作水平,,定期使用該菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,可及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題,以保證微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量,。
形態(tài)特征:革蘭氏陽(yáng)性粗大桿菌,,顯微鏡油鏡下可見紫色粗大桿菌,大小不一,,可見卵圓形透亮芽孢,,甚至可見鞭毛可位于菌體遠(yuǎn)端至尾端5。
培養(yǎng)特性:為嚴(yán)格厭氧菌,,培養(yǎng)時(shí)需要?jiǎng)?chuàng)造嚴(yán)格的無氧環(huán)境,,常用的培養(yǎng)基包括環(huán)絲氨suan - 頭孢西ding - 果糖瓊脂(CCFA)等。其培養(yǎng)過程相對(duì)較慢,,通常需要 2-3 天甚至更長(zhǎng)時(shí)間才能觀察到明顯的菌落生長(zhǎng),,菌落通常較大、白色或淡黃色,、邊緣不整齊,,可能會(huì)產(chǎn)生一種類似于腐敗的氣味。
其他特性:艱難梭菌芽孢抵抗力十分強(qiáng)大,,在體外有氧環(huán)境中仍可存活數(shù)周 - 數(shù)月,,耐熱,在 100℃的溫度下需要 1 小時(shí)才能死亡,,不耐干燥,,不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿,對(duì)抗菌藥物高度耐藥,,對(duì)乙醇敏感,,醫(yī)院中許多消毒劑均能將其殺死。
通常采用西林瓶包裝,,內(nèi)裝凍干粉,。常見規(guī)格可能為 1 支 / 盒等,具體會(huì)因產(chǎn)品批次和銷售形式有所不同,。
西林瓶請(qǐng)置于 - 20℃保存,,避免反復(fù)凍融,以保持菌株的活性14。若為短期保存,,也可在 2-8℃下存放14。
復(fù)蘇:復(fù)蘇前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備,,所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)及無菌條件下進(jìn)行,。啟開前,用 75% 酒精棉消毒西林瓶表面,。在無菌條件下,,打開西林瓶膠塞,加入復(fù)蘇液,,將凍干菌種制成懸浮液,,然后用無菌滴管或移液器吸取適量,移至非選擇性固體培養(yǎng)基平板或液體培養(yǎng)基上,,按推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)和傳代保存,。
培養(yǎng)和傳代:艱難梭菌質(zhì)控菌種購(gòu)買后應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用,復(fù)蘇后的菌種一般宜傳代 2-3 次后使用,,菌種傳代 5 次后建議棄置,。培養(yǎng)時(shí)需按照推薦的培養(yǎng)條件進(jìn)行,一般為 36℃±1℃,,在厭氧環(huán)境下培養(yǎng) 48-72 小時(shí),。