黃熱病是由黃熱病毒引起的急性傳染病,，主要通過(guò)伊蚊傳播,，特別是在非洲和南美洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)呈地方性流行,。

  黃熱病的傳播途徑主要是經(jīng)蚊的叮咬。伊蚊是黃熱病的主要傳播媒介,，其中在城市地區(qū),，埃及伊蚊是主要傳播者，而在農(nóng)村或叢林地區(qū),，趨血蚊和非洲伊蚊則扮演了重要角色,。當(dāng)這些蚊子叮咬感染了黃熱病病毒的人或動(dòng)物時(shí)，病毒就會(huì)進(jìn)入蚊子的體內(nèi),，并在其唾液腺中復(fù)制,。當(dāng)這些蚊子再次叮咬健康人時(shí)，病毒就會(huì)通過(guò)蚊子的唾液傳播給人類,，從而引發(fā)新的感染,。

  黃熱病的傳播也受到環(huán)境因素的影響。例如,，氣候變化,、人類活動(dòng)導(dǎo)致的環(huán)境改變以及城市化進(jìn)程等都可能影響到伊蚊的繁殖和分布，從而影響到黃熱病的傳播,。例如,，氣候變化可能導(dǎo)致溫度升高和降雨量增加，這為伊蚊的繁殖提供了有利的環(huán)境條件,。而城市化進(jìn)程則可能導(dǎo)致城市環(huán)境的惡化,，如垃圾堆積,、水源污染等，這些都可能吸引伊蚊棲息并傳播病毒,。

  因此,，對(duì)于黃熱病的預(yù)防和控制，第一,，加強(qiáng)公共衛(wèi)生管理,，提高公眾對(duì)黃熱病的認(rèn)識(shí)和防范意識(shí)。第二,，采取有效的措施來(lái)控制伊蚊的數(shù)量,，如清理垃圾、消除積水,、使用殺蟲劑等,。黃熱病的形成和傳播是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及到病毒,、媒介,、環(huán)境等多個(gè)因素。只有深入了解這些因素,，才能更好地預(yù)防和控制黃熱病的傳播,。

黃熱病毒IgM抗體ELISA試劑盒

儲(chǔ)存和使用期：2-8°C

應(yīng)用：用于定性檢測(cè)人血清,，血漿,，細(xì)胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

介紹

黃熱病,，是一種急性病毒性疾病,。在大多數(shù)情況下，癥狀包括發(fā)熱,，寒戰(zhàn),，食欲不振，e心,，特別是在背部的肌肉痛,，和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善,。在一些人在一天內(nèi)改善,，發(fā)燒回來(lái)，腹痛發(fā)生,，肝損傷開始導(dǎo)致黃色皮膚,。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問題的風(fēng)險(xiǎn)也增加,。

測(cè)定原理

96孔板YFV-IgM特異性抗原,。將對(duì)照或測(cè)試樣品加入到合適的孔中并孵育,。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測(cè)試劑加入到孔中,。 TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應(yīng),。 TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍(lán)色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM量成比例,。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過(guò)分光亮度計(jì)測(cè)量吸亮度,，然后可以計(jì)算YFV-IgM的濃度。

套件組件

1. 一個(gè)96孔板預(yù)涂

2. 陽(yáng)性對(duì)照：0.5ml

3. 陰性對(duì)照：0.5ml

4. 洗滌緩沖液（30×）：20 ml,。稀釋：1:30

5. 樣品稀釋緩沖液：6ml

6. 6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml

7. 終止液：6ml

8. TMB底物：6ml

9. TMB底物B：6ml

10. 板密封：2

11. 密封袋：1

需要材料但不提供

1.37℃培養(yǎng)箱

2.酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)：450nm）

3.精確的移液器和一次性移液器吸頭

4.自動(dòng)洗板機(jī)

5.ELISA振蕩器

1.5ml管

7.板蓋

8.吸收濾紙

9.100ml和1L體積量筒,。

使用程序:

A.制備樣品和試劑

1. 樣品

收集并立即分析測(cè)試樣品（2小時(shí)內(nèi)）后立即分離?；虻确植㈤L(zhǎng)期儲(chǔ)存在-20°C,。避免多個(gè)凍融循環(huán)。

2細(xì)胞培養(yǎng)上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘,，以去除沉淀,，立即分析或分裝，并儲(chǔ)存于-20℃,。

血清：在室溫下凝結(jié)血清（約4小時(shí)）,。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分,，并儲(chǔ)存在-20°C,。

2血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘,。立即分析或等分,，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍。

尿：在無(wú)菌容器中收集,，以2000-3000×rpm離心20分鐘,。立即分析或等分，并存儲(chǔ)在-20°C冷凍,。

組織：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化,。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化,，并對(duì)細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理,。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測(cè)定或等分并儲(chǔ)存在-80℃,。

注意：

1.wan全凝結(jié)血液樣品,，離心，避免溶血和沈淀,。

2.NaN3不能用作試驗(yàn)樣品防腐劑,，因?yàn)樗种艸RP,。

2.洗滌緩沖液

用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。

B.測(cè)定程序

在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫,。建議繪制每個(gè)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

1.在預(yù)涂板上分別設(shè)置陽(yáng)性/陰性，測(cè)試樣品和對(duì)照（零）孔,，并記錄它們的位置,。

2.將50μl的陰性和陽(yáng)性對(duì)照等分到設(shè)定的孔中。

3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液,。

4.向測(cè)試樣品孔中加入50μl適當(dāng)稀釋的樣品,。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動(dòng)平板以混合內(nèi)容物,。

5.用蓋子密封板,，并在37℃孵育30分鐘。

6.取下蓋子并通過(guò)在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來(lái)丟棄板內(nèi)容物,。

7.棄去溶液,，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候wan全干燥,。

手動(dòng)清洗：丟棄溶液,，不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體,。將洗滌緩沖液填滿每個(gè)孔,，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物,，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打,。洗板五次。

自動(dòng)洗滌：棄去所有孔中的溶液,，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過(guò)量填滿孔）。在最后的洗滌之后,，翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料,。建議將清洗器設(shè)置為1分鐘的浸泡時(shí)間。

8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑（對(duì)照孔除外）,。在每個(gè)孔底部加入溶液,，不要接觸側(cè)壁。

9.用蓋子密封板,，并在37℃孵育30分鐘,。

10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次,。

11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B,，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘,。避免暴露于光。

12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液,，充分混勻,。顏色應(yīng)立即變?yōu)辄S色。

13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi),。對(duì)于計(jì)算,，（相對(duì)O.D.450）=（每個(gè)孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以作為每種標(biāo)準(zhǔn)溶液（Y）的相對(duì)O.D.450與標(biāo)準(zhǔn)溶液（X）的相應(yīng)濃度作圖,?？梢詮臉?biāo)準(zhǔn)曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。

14.注意：如果稀釋樣品,，稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度,。

C.結(jié)果確定

1.試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照的平均值≥1.00; 陰性對(duì)照的平均值≤0.10。

2.臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=負(fù)控制的平均值+0.15

3.陰性結(jié)果：如果OD值<CUT OFF,，樣品為人YFV-IgM陰性,。

4.陽(yáng)性結(jié)果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類YFV-IgM陽(yáng)性,。

D.注意事項(xiàng)

1.在實(shí)驗(yàn)之前,，離心每個(gè)試劑盒組分?jǐn)?shù)分鐘，將所有試劑倒入試管底部,。

2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡,。

3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況,，請(qǐng)加熱管以溶解,。

4.建議每個(gè)對(duì)照和樣品一式兩份或重復(fù)測(cè)量三次。

5.不要讓板在任何時(shí)候wan全干燥,！這可以使板上的生物材料失活,。

6.不要重復(fù)使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染,。

7.不要使用不同套件中過(guò)期的組件或組件,。

8.將TMB底物B儲(chǔ)存在黑暗中，并且為了避免板溫育對(duì)于溫度差的邊緣效應(yīng),，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘,。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中,。

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