簡要描述：沙門診斷血清采用實(shí)時熒光PCR技術(shù),，針對沙門氏菌血清型特異性基因設(shè)計引物和探針,。PCR擴(kuò)增過程中,，與模板結(jié)合的探針被Taq酶分解產(chǎn)生熒光信號，熒光定量PCR儀根據(jù)檢測到的熒光信號繪制出實(shí)時擴(kuò)增曲線,。

 沙門氏菌抗血清在兔體內(nèi)培育,，包括O和H抗血清。Vi抗體為單克隆抗體,，在小鼠腹腔液中生成并提取,。根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康模寡蹇蓡为?dú)或聯(lián)合使用,?？寡骞?yīng)規(guī)格為3 ml瓶裝產(chǎn)品（以疊氮hua鈉作為防腐劑）。已通過吸附排除交叉反應(yīng),。

 當(dāng)細(xì)菌培養(yǎng)物與直接針對細(xì)菌表面成分的特異性抗血清混合時,，細(xì)胞之間將通過抗原-抗體鍵結(jié)合在一起而形成聚集（凝集）。通常裸眼可以觀察到在懸液中的團(tuán)塊形成,。通過將特異性抗血清與沙門氏菌培養(yǎng)物混合,，可以確定O和H抗原。根據(jù)觀察到的凝集結(jié)果并結(jié)合Kauffmann-White表1可確定細(xì)菌的血清型,。

丹麥SSI沙門氏菌屬診斷血清試劑盒說明書

步驟通用
將生理鹽水作為陰性對照,，并且其檢測結(jié)果必須為陰性。如陰性對照結(jié)果為陽性（凝集）,，則表明菌株發(fā)凝集,，即O粗糙型。

與O和H抗血清的玻片凝集
使沙門氏菌在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上生長過夜,。半固體瓊脂培養(yǎng)基是zui適用于H分型的培養(yǎng)物生長的培養(yǎng)基,，但如H抗原表達(dá)良好，則可以在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上確定血清型,。
1. 將一小滴（約20 μl）抗血清滴在玻片上,。
2. 將來自培養(yǎng)基的一些菌落取樣轉(zhuǎn)移到抗血清液滴中，然后充分混合,。培養(yǎng)物的數(shù)量應(yīng)足以產(chǎn)生明顯的乳白色混濁,。取樣使用接種環(huán)或牙簽。
3. 將玻片前后傾斜5 – 10秒,。
4. 手持玻片在采用暗背景的光源前（間接照明）用裸眼進(jìn)行觀察,，讀出反應(yīng)結(jié)果。

5. 陽性反應(yīng)為可見凝集,。陰性反應(yīng)為保持均一的乳白色混濁,。遲發(fā)或較弱的凝集應(yīng)視為陰性結(jié)果。 無反應(yīng)的原因可能是菌株表達(dá)Vi抗原（見下文）,、所用抗血清未能包含待檢菌株的血清型或菌株并非沙門 氏菌,。

Vi 抗原的檢測
Vi抗原的存在可能干擾或阻止菌株與O抗血清的凝集反應(yīng),。因此對陰性分離株必須檢測Vi抗原。因在Vi抗 原中可能形成變異,，所以選擇單一菌落是非常重要的,，表達(dá)Vi抗原的菌落較Vi陰性菌落的不透光性更強(qiáng)。

在瓊脂平板上的H相誘導(dǎo)（S. Gard方法）2
1. 使半固體瓊脂在微波爐或水浴中融化（100 °C）,，然后冷卻至45°C,。
2. 將100 μl用于相誘導(dǎo)（對應(yīng)于已經(jīng)確定的相）的H抗血清置于一個小培養(yǎng)皿的中央。
3. 將10 ml半固體瓊脂倒入抗血清中,，最終結(jié)果是形成相誘導(dǎo)血清的1:100稀釋液,。
4. 將平板于室溫（22-25°C）下放置10-15分鐘，待其凝固,。
5. 用接種環(huán)從瓊脂平板或肉湯培養(yǎng)基中取出一滿環(huán)新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物,，接種在平板的中央。
6. 于35-37°C培養(yǎng)一整夜,。
7. 在生長區(qū)域邊緣取培養(yǎng)物用于玻片凝集,。使用Kauffmann-White表選用相關(guān)的H抗血清。 如H相誘導(dǎo)未成功,，則需考慮增加在半固體瓊脂平板中的抗血清數(shù)量,。

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