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牛羊布病抗體快速檢測卡
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一.勻漿
1)從伍中提總RNA、
,。.液氮研:結(jié)塊直入乳缽中,,入少液氮,迅速研磨,,待結(jié)變軟,,加少液氮,再研,,如此三次,,如每五十腮100mg結(jié)入1ml Trizol,轉(zhuǎn)心管以下步行,。
卜人.勻漿:以電動勻漿器盡勻漿2min腮,。,。注意,結(jié),,積不能過Trizol積之10%,,不會不好勻漿效。
二)自養(yǎng)細(xì)胞中提總RNA
,。.粘壁養(yǎng)細(xì)胞:不須蛋白酶消化,,先將養(yǎng)基去,然后直將Trizol預(yù)于養(yǎng)瓶中消,、解坼細(xì)胞,,Trizol積案10cm2 / ml之比例加。
卜人.懸浮養(yǎng)細(xì)胞:直心收細(xì)胞后以Trizol重懸,、解坼,,每1ml Trizol可解坼五×106一動植之物或酵母細(xì)胞,或一人細(xì)菌細(xì)胞107×,。注意,,于入Trizol前不可以諸緩沖液滌細(xì)胞,則益mRNA降解之機(jī),。別,,在解坼酵母或細(xì)菌細(xì)胞則假勻漿器。
二.相分離
1)勻漿結(jié)入Trizol后,,室溫置5min,,使其能解坼。意:此時可入真久存七十,。,。
室溫!),,12000 min丫,。,離心五min,。取清于一新管,。
三)按1ml Trizol入二百µllv枋,以手蕩混勻后室溫置二心三min,。注意:禁漩振蕩器,,以基因組DNA斷。
四四真,。,,12000 min丫。,,離十五min,。謹(jǐn)取上水于一新管。意:慎勿取中界面,;若兼提DNA與蛋白質(zhì),,則保留重者相存于四真冰箱中,若但取RNA,,則棄下者相,。
三.RNA澄
1)按1ml Trizol入異丙醇。.五ml,,混沌勻,,室溫置五腮十min。
四真?。?,12000 min丫。,,離15min,。棄上清,RNA湛管底,。意:RNA湛于離是非見之,,常在離管之緣或底成凝膠狀丸。