口蹄疫病毒O型核酸檢測試劑盒

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口蹄疫病毒O型核酸檢測試劑盒

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本實驗嘅關(guān)鍵步驟系獲得適當(dāng)嘅抗體DNA復(fù)合物。用鏈親和齋將生物齋識認(rèn)嘅抗體與生物齋識認(rèn)嘅DNA偶聯(lián)嘅方法,，因個個鏈親和齋分子可與四個生物齋分子結(jié)合,，就要優(yōu)化反應(yīng)條件，以令到個個鏈親和齋分子既可結(jié)合上抗體分子,，又可以結(jié)合上DNApian段,。
此外仲可用化學(xué)方法將DNApian段與抗體分子共價偶聯(lián)，即將抗體分子同5′四氨基修飾嘅DNApian段分別就用唔同嘅雙功能偶聯(lián)劑開通,，然后通過自發(fā)嘅反應(yīng)偶聯(lián)到一齊,，比如，用,？N,？Succinimidyl？S,？acetyl thioacetate（SATA）活化氨基修飾嘅DNApian段,，用SulfoSuccinimidyl 4（maleimidomethyl）Cyclohexane1Carboxylate（SulfoSMCC）修飾抗體分子，然后將二者喺一小管中撈,，透過加鹽酸胲（Hydroxylamine hydrochloride）令二者偶聯(lián)喺埋一齊,。免疫PCR具有高度敏感性。就,，抗體同識認(rèn)DNA嘅任何非特異性結(jié)合均會導(dǎo)致嚴(yán)重嘅本底問題,。因而喺加抗體同識認(rèn)DNA后要盡可能*噉清洗。即使有特異性結(jié)合嘅抗體或者識認(rèn)DNA畀洗掉,，亦可喺zui后通過增加PCR嘅循環(huán)次數(shù)到彌補。此外,，應(yīng)用有效嘅封閉劑對防止非特異性結(jié)合都系好重要嘅,。可用脫脂奶粉同牛血清白蛋白做蛋白封閉劑，用魚精DNA做核酸封閉劑,。防止本底信號嘅另一個重要因素系控制污染,，呢啲都系所有敏感嘅檢測系統(tǒng)存在嘅問題。即使每一步試驗都做得好認(rèn)真,，重復(fù)使用同樣嘅引子同識認(rèn)DNA均會惹假陽性信號,。免疫PCR嘅一個主要優(yōu)點系識認(rèn)DNA序列*系人為選定。就識認(rèn)DNA及其引子可經(jīng)常改轉(zhuǎn),，以逃過由於污染造成嘅假陽性信號,。
免疫PCR可以檢測到常規(guī)免疫學(xué)方法唔檢測嘅樣品。就,，應(yīng)用免疫PCR可喺微觀水平（單細(xì)胞）檢測到抗原,，定量PCR產(chǎn)物可以預(yù)某一標(biāo)本中嘅抗原數(shù)量，喺臨床診斷中可喺病早期抗原量好低時檢測到微量嘅抗原,。
本實驗之要也,，得之其抗體DNA舊物。以執(zhí)親素以素識之物抗體與物素識之DNA偶聯(lián)之法,，以每執(zhí)親素惡可與四物合素惡,，是以優(yōu)化應(yīng)也，以致每執(zhí)親素惡既能合上抗體分子,，又能合上DNApian段,。
又可化學(xué)法將DNApian段與抗體法共價偶聯(lián)，將抗體法與五′端氨基飾之DNApian段各以異之雙明偶聯(lián)荊激活,，后因自應(yīng)偶聯(lián)就之,，譬如，用,？為二千,？Succinimidyl？S,？acetyl thioacetate（SATA）活化氨基飾之DNApian段,，以SulfoSuccinimidyl四（maleimidomethyl）Cyclohexane1Carboxylate（SulfoSMCC）飾抗體法，然后將二者混在一小管中,，因入鹽酸胲（Hydroxylamine hydrochloride）使二者偶聯(lián)集,。免疫PCR有高敏感性。是故,，抗體與志之所DNA非特異姓合均致重者本底也,。因于入抗體與章DNA后必盡可掃地洗。雖有異性合之抗體或識DNA為洗之,，亦在zui后因增PCR之循環(huán)數(shù)得補,。此外,，用有效者封閉劑謂防非特異姓合亦甚重者?？擅撝谭叟c牛血清白蛋白為白渾封閉劑,，以為核酸封閉劑DNA也。防本底號之一大端為控染,，此亦諸驚之檢統(tǒng)存也,。雖每一步試皆為甚敬，重用之引與同志DNA均有假陽號,。免疫PCR之一要善為章DNA序全是人間,。故標(biāo)DNA及引可常易，以免以污為之假陽號,。
免疫PCR可檢于常免疫學(xué)法不檢之,，。是故,，用免疫PCR可在微觀平（單細(xì)胞）檢至抗原,，定量PCR物可度一標(biāo)本中之抗原數(shù)，在事中可于病初診抗原量低時檢至微量之抗原,。