霍亂弧菌01型核酸檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒,；

 保存條件：避光 -20度 保存,。

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霍亂弧菌01型核酸檢測試劑盒

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1.菌懸液嘅制備
1）攞培養(yǎng)24個鐘嘅酵母菌嘅斜面一支，用無菌生理鹽水將菌苔洗下,，并倒入裝有玻璃珠嘅大試管中,，振蕩半個鐘，以打碎吖菌蚊,。
2）將上述菌液離心（1500r/min,，離心五分鐘），棄去上清液,，將菌體用無菌生理鹽水洗滌2—三次,，zui后做菌懸液。
3）用顯微鏡直接計數(shù)法計數(shù),，較細胞濃度為每毫升108個,。
2.薯仔瓊脂培養(yǎng)基融化后,，凍到55℃左右時又平板，凝固后待用,。
3.紫外線處理
1）將紫外線燈掣打開預(yù)熱約四個字,。
2）攞直徑9cm無菌平皿一套，分別就加上述菌懸液6－7ml,，并放入無菌大頭針于平皿中,。
3）將裝有菌懸液嘅1平皿置于磁力攪拌器上，喺隔為30cm,，功率為15W嘅紫外線燈下分別就攪拌照射30s,，60s，90s,，120s,，150s，180s,。
4.稀釋喺燈下,，將上述經(jīng)誘變處理嘅菌懸液以10倍稀釋法稀釋成10-1-10-6（具體可按預(yù)嘅存活率進行稀釋）。
5.扠平板羅10-5,、10-6,、10-7三個稀釋度扠平板，個個稀釋度扠平板三只,，每只平板加稀釋菌液0.1ml,，用無菌玻璃返正扠勻。以同樣用,，攞未經(jīng)紫外線處理嘅菌稀釋液扠平板作對照,。
6.培養(yǎng)
將上述扠勻嘅平板，靜置2min后,，用黑布（或者黑紙）包好,，置36℃、42℃,、五十℃三個唔同溫度下培養(yǎng)24個鐘,。注意個個平皿背面要表明處理時間同稀釋度。
7.計數(shù)將培養(yǎng)24個鐘后嘅平板拎出進行計數(shù),，根據(jù)對照平板上菌落數(shù),，計算
1）唔同溫度下菌嘅存活率
2）唔同紫外線處理時間菌嘅存活率
3）同溫度下稀釋倍數(shù)嘅準確性

1 .菌懸液の製備
いち）を育成の24時間の酵母菌の斜面いち本用無菌生理食塩水を洗って菌苔、それを盛ガラス玉の大管瓶の中,、振動さんじゅう分を砕いて菌ブロック,。
に）の上述の菌液遠心（1500r / min、遠心ご分）,、捨てに上澄み液は,、菌體用無菌生理食塩水洗浄にーさん,、zui後で菌懸濁液。
3）顕微鏡で,、直接計算法をカウントし,、細胞濃度を1ミリリットルあたり108個に調(diào)整する。
2 .ジャガイモの寒天育成基が溶けた後に,、寒くて55℃ぐらいの時は平板で,、固まった後に使います。
3 .紫外線処理
1）紫外線ランプのスイッチを約20分ほど開けます,。
に）を直徑9無菌シャーレいちセット,、加入する上記菌懸濁液6－7mlを入れ、無菌ピン于平シャーレで,。
さん）が菌を盛懸濁液のいちシャーレをマグネチックスターラーに,、距離を30 cm、電力を15W紫外線照射燈の下にそれぞれ攪拌30秒以內(nèi),、60s,、90s、120s,、150s,、180s。
よんしよ.希釈に赤信號では,、上記の経誘變処理の菌懸濁液をじゅう倍希釈法は希釈10-1-10-6（具體的に推定の生存率を希釈）,。
ご.塗りを10-5、薄型10-6,、3つの希釈度塗り板- 7であって、すべての希釈度塗り薄型さんだけ,、どの薄型加希釈液0.1ml菌,、用無菌ガラススパチュラ均等に塗る。同様の操作で,、紫外線処理を受けていない菌希釈液をとり,、平板に塗布する。
6 .
上述の均等に塗るの薄型,、靜置2min後,、黒い布（または黒紙）に包んで、置36℃,、42℃で,、3つの異なるごじゅう℃溫度を24時間。すべての平皿の裏には処理時間と希釈度が表示されるように気をつけます,。
7 .數(shù)は,、24時間後のタブレットから抽出してカウントを行う,。
1）異なる溫度下菌の生存率
2）紫外線処理時間菌の生存率
3）同じ溫度で倍數(shù)の正確性を希釈する

HeLa細胞蛋白質(zhì)嘅制備
1）HeLa-kyoto細胞培養(yǎng)于DMEM中，并用nocodazole過夜處理嚟抑制生長,。
2）用刮刀收取細胞,，并用PBS洗三次。一個托盤（25公分×25厘米,，100毫升介質(zhì)）可以惹約4毫克嘅蛋白質(zhì),。
3）將細胞懸液加到兩倍體積嘅裂解緩中，并通過細支嚟抽吸液體破壞其細胞膜,。4℃,，五g低溫離心三個字，有冇收集蛋白,。
2.丙酮沉淀蛋白質(zhì)
1）加5倍體積嘅雪丙酮到蛋白溶液,，零下30°C.哺育。
2）4℃,，五g低溫離心半個鐘,。
3）棄上清，將蛋白質(zhì)沉淀與80%嘅雪丙酮仔細撈勻,，4℃,，五g低溫離心半個鐘。
4）將蛋白沉淀晾干（逃過*糠）,，將沉淀溶解于消化緩沖液中（8 M尿素,，0.5 M式碳氫銨），較蛋白濃度為5µg/µL,。（注：蛋白質(zhì)溶液pH值應(yīng)該為8.0,。喺我哋嘅實驗室中，用Bradford法測定蛋白濃度）,。
3.原同烷基化蛋白質(zhì)
1）向蛋白溶液中0.05µg嘅DTT,，56℃哺育半個鐘，持續(xù)振蕩,。
2）向其中添加碘乙酰胺,，令其終濃度為每µg蛋白中含0.25µg，鼆中室溫哺育半個鐘,。
3）加DTT原液至終濃度為每µg蛋白含0.25µg,，閘住反應(yīng)。
4.曳氨酸- C.消化
1）將樣品溶解于6 M尿素（含五十mM式碳氫銨）緩沖液,，并添加曳氨酸-C令其終濃度為每五十µg蛋白含1µg,。
2）30℃哺育2鐘，將溶液稀釋至0.8 M尿素含五十mM式碳氫銨,。
3）每60μg蛋白中加一µg嘅胰蛋白酶,，37℃哺育2個鐘,。
4）向樣品中再添加等量嘅胰蛋白酶，37℃哺育過夜,，加TFA進行酸化,，令樣品嘅pH值為2嚟終止消化。
5）將多肽混合物等量分裝,，并儲存喺零下80攝氏度環(huán)境中,。