腸侵襲性大腸桿菌核酸檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存,。

    我司提供各種流感病毒,、副流感病毒、呼吸道合胞病毒,、冠狀病毒,、輪狀病毒、桿菌,、鏈球菌,、熱帶病毒等等核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法），還有各種原料和質(zhì)控品,，隨時歡迎您的來電：  楊

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【市場部】    楊永漢

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1）用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后,，用DEPC水沖洗,。
2）用RNAZap擦洗多孔滲水屏同膠屏，用DEPC水沖洗二次,。
3）鏈接真空泵同真空轉(zhuǎn)移儀,，剪取一蚊適當(dāng)大小嘅膜（膜嘅四邊緣應(yīng)大于膠屏孔口嘅5mm），膜喺Transfer buffer浸濕五分鐘之后,，放置喺多孔滲水屏嘅適當(dāng)位,。
4）起上膠屏，打上外框,，扱上鎖,。
5）將膠嘅多余地方切除，切后嘅膠四邊緣要可以打過膠屏窿,，并zui低限打過邊緣約2mm,，以防止漏氣。
6）將膠小心放置喺膜嘅上面,，膜與膠之間唔可以有氣泡,。
7）打開真空泵，令壓強(qiáng)維持得喺50~58mbar,；即刻將transfer buffer加到膠面同周圍,。每隔10min喺膠面加埋1ml transfer buffer，真空轉(zhuǎn)移2個鐘,。
8）轉(zhuǎn)膜后,，用鑷子擷住膜,，于1x MOPS Gel Running buffer中細(xì)仔溝洗十秒，抹得甩殘余嘅膠同鹽,。
9）用嗍水紙吸取膜上多余嘅液體之后，將膜置于UV交聯(lián)儀中自動交聯(lián),。
10）將膠同紫之外,，交聯(lián)后嘅膜，喺紫之外,，燈下檢測轉(zhuǎn)移效率,。（逃過咁長嘅紫之外，曝光時間）
12）將膜喺-20℃保存,。
7.探針嘅制備
1）喺1.5ml離心理中配制以下反應(yīng)液：
模板DNA（25 ng）1ul
Random Primer 2ul
滅菌水11ul
總體積：14ul
2）95°C.加熱3分鐘之后,，快手放置于冰冷卻5min。
3）喺離心理中按下列順序加以下溶液：
10×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP 5 ul
Exo-free Klenow Fragment 1 ul
4）撈勻后（25ul）,，37°C.下反應(yīng)半個鐘,。短暫離心，有冇收集溶液到理底,。
5）65°C.加熱5min令酵素失工作,。
8.探針嘅純化同過活性測定：
1）準(zhǔn)備凝膠：將1g凝膠加30ml嘅DEPC水中，浸泡過夜,。用DEPC水洗滌膨脹嘅凝膠數(shù)次,，以除去可溶解嘅葡聚糖。換用新配制嘅TE（PH7.6）,。
2）攞1ml一次過針筒,，抹得甩內(nèi)肉推捍，將針筒篤用硅化嘅玻璃纖維塞住,，喺針筒中裝填Sephadex G-50凝膠,。

いち）用3％に移転儀オキシドール真空後、水で洗い流しDEPC,。
に）で洗うRNAZap多孔漏水モニターやプラスチック. DEPC水で洗い流して二度,。
さん）接続真空ポンプと真空計(jì)剪取移転、ひとつの適當(dāng)な大きさの膜膜の四週辺はよりプラスチック-オリフィスの5 mm）,、膜トランスファーbuffer濡れご分後,、置く多孔漏水-適切な位置。
よんしよ）にふたをかぶせてプラスチック.アウトライン,、バックル施錠,。
ご）は接著剤の余分な部分切除、切った後の接著四エッジがプラスチックパネル穴をし,、少なくとも約2 mmを端漏れ防止,。
6）接著剤を膜の上に置いておくと,、膜と接著剤の間には気泡ができない。
ななしち）を開けて真空ポンプを維持して,、圧力ごじゅう～58mbar,；はすぐtransfer bufferゴム面と週りに加えて。10minゴム面でごとに加え1ml  transfer buffer,、真空移転に時間,。
はち）転?zāi)め帷ⅴ豫螗互氓趣遣钉蓼à肽い稀?x MOPSジェルRunning bufferの中でそっと浸し洗浄じゅう秒,、殘りの接著剤と塩を取り除く,。
9）水用紙で膜に余分な液體を吸収した後、UV交換器の中に膜を置く,。
10）は,、ゴムと紫外線を交交した膜で、紫外線の下で,、移動効率を検出する,。紫外線露出時間を避ける
12）膜は- 20℃で保存されます。
7 .針の製備
いち）1.5ml遠(yuǎn)心チューブで調(diào)合する以下の反応液：
DNAテンプレート（25 ng）1ul
ランダムにPrimer 2ul
滅菌水11ul
総體積：14ul
に）95°C加熱さん分後,、迅速に置いては5min冷たい,。
3）離心管に以下の順序で以下の溶液を追加する。
じゅう×Buffer 2.5ul
dNTP Mixture 2.5ul
111 TBq / mmol [ a-32P」dCTPごul
Exo-free Klenow Fragmentいちul
よんしよ）混合後（25ul）,、37℃で反応さんじゅう分,。しばらく心を離すと、溶液を収集して底を置く,。
ご）65°C加熱5min酵素を失活,。
8 .探知の純化及び比活性測定：
いち）の準(zhǔn)備ゲル：1 gゲル加入30 mlの水に浸しDEPC、泊まる,。DEPC水で洗浄膨張のゲル數(shù)回,、溶解除去のグルカン。替えのチームＥ（PH7.6）新配合,。
に取っ1ml使い捨て注射器,、除去內(nèi)芯ツイ守る、注射器の底で珪化のガラス繊維を,、注射に裝填Sephadex G-50ゲル,。

1) 用3%雙氧水浸泡真空轉(zhuǎn)移儀后，用DEPC水沖洗,。
   2) 用RNAZap擦洗多孔滲水屏和塑膠屏,，用DEPC水沖洗二次。
   3) 連接真空泵和真空轉(zhuǎn)移儀，剪取一塊適當(dāng)大小的膜（膜的四邊緣應(yīng)大于塑膠屏孔口的5mm）,，膜在Transfer buffer浸濕5分鐘后,，放置在多孔滲水屏的適當(dāng)位置。
   4) 蓋上塑膠屏,，蓋上外框,，扣上鎖。
   5) 將膠的多余部分切除,，切后的膠四邊緣要能蓋過塑膠屏孔,，并至少蓋過邊緣約2mm，以防止漏氣,。
   6) 將膠小心放置在膜的上面,，膜與膠之間不能有氣泡,。
   7) 打開真空泵,，使壓強(qiáng)維持在50~58mbar；立即將transfer buffer加到膠面和四周,。每隔10min在膠面加上1ml transfer buffer,，真空轉(zhuǎn)移2小時。
   8) 轉(zhuǎn)膜后,，用鑷子夾住膜,，于1x MOPS Gel Running buffer中輕輕泡洗10秒，去除殘余的膠和鹽,。
   9) 用吸水紙吸取膜上多余的液體后,，將膜置于UV交聯(lián)儀中自動交聯(lián)。
   10) 將膠和紫外交聯(lián)后的膜,，在紫外燈下檢測轉(zhuǎn)移效率,。(避免太長的紫外曝光時間)
   12) 將膜在-20℃保存。
7. 探針的制備
   1) 在1.5ml離心管中配制以下反應(yīng)液：
模板DNA(25 ng) 1ul
Random Primer    2ul
滅菌水     11ul
總體積：   14ul
   2) 95°C加熱3分鐘后,，迅速放置于冰冷卻5min,。
   3) 在離心管中按下列順序加入以下溶液：
10×Buffer     2.5ul
dNTP Mixture   2.5ul
111 TBq/mmol[a-32P]dCTP    5 ul
Exo-free Klenow Fragment     1 ul
   4) 混勻后（25ul），37°C下反應(yīng)30分鐘,。短暫離心,，收集溶液到管底。
   5) 65°C加熱5min使酶失活,。
8. 探針的純化及比活性測定：
   1) 準(zhǔn)備凝膠：將1g凝膠加入30ml的DEPC水中,，浸泡過夜。用DEPC水洗滌膨脹的凝膠數(shù)次,，以除去可溶解的葡聚糖,。換用新配制的TE（PH7.6）。
   2) 取1ml一次性注射器，去除內(nèi)芯推捍,，將注射器底部用硅化的玻璃纖維塞住,，在注射器中裝填 Sephadex G-50凝膠。