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第三代促甲狀腺激素受體抗體檢測產(chǎn)品的性能評(píng)估
閱讀：1204 發(fā)布時(shí)間：2022-10-17
Graves病患者血清中,，TSH受體自身抗體（TRAb）的病理作用已經(jīng)明確。目前,，檢測TSHR自身抗體有兩種方法,。一種方法是基于類似TSH的自身抗體在細(xì)胞系中誘導(dǎo)第二信使cAMP的能力，稱為生物測定(bioassay)方法,，該方法能夠根據(jù)其增強(qiáng)或抑制cAMP合成的生物活性來區(qū)分刺激性抗體（TSAb）和阻斷性抗體（TSBAb）,。另一種方法是基于豬TSHR或人類重組TSHR的TRAb檢測，患者血清中的TRAb和牛TSH（用I-125或生物素標(biāo)記）共同競爭TSHR上的結(jié)合位點(diǎn),。
Smith博士（RSR公司創(chuàng)始人）初次報(bào)道了一種測定血清TRAb的新方法[1],，其中，患者血清中的TRAb可與生物素標(biāo)記的促甲狀腺激素受體人單克隆刺激型抗體M22[1]產(chǎn)生競爭,，抑制M22與ELISA板孔上包被的TSHR的結(jié)合,，以競爭抑制法構(gòu)建酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）[2]。
本研究旨在比較兩代和三代TRAb檢測方法的性能差異,，二代為抗體競爭抑制TSH，三代為抗體競爭抑制M22,。此外,，我們?cè)u(píng)估了三代TRAb檢測產(chǎn)品在鑒別未經(jīng)治療的Graves病（GD）患者和無痛性甲狀腺炎（PT）患者上的應(yīng)用前景,。
研究對(duì)象
檢測方法
圖1展示了基于M22的測定（表述為第三代TRAb,，以TRAb3rd表示）和基于抑制TSH-生物素的測定（表述為第二代TRAb測定,，以TRAb2nd表示）的檢測原理。
圖1 二代和三代TRAb檢測原理,。二代TRAb利用待測TRAb與TSH-生物素形成競爭抑制,，抑制其與固相TSHR結(jié)合；三代TRAb利用待測TRAb與M22-生物素形成競爭抑制,，抑制其與固相TSHR結(jié)合,。
臨界值定義以及統(tǒng)計(jì)分析
研究分析了230名健康對(duì)照者的血清抗體，只有1名（0.43%）對(duì)M22結(jié)合值的抑制率大于臨界值15%（32.8%）,。
從244例未經(jīng)治療的GD患者中計(jì)算靈敏度（真陽性結(jié)果）,，并從三個(gè)對(duì)照組中計(jì)算特異性（真陰性結(jié)果）。二代TRAb檢測特異性*,，靈敏度99.2%時(shí),，抑制率臨界值為22%。
為了確認(rèn)三代TRAb產(chǎn)品的臨床臨界值,，我們對(duì)244例未經(jīng)治療的GD患者（疾病組）和三個(gè)不同對(duì)照組（下表）進(jìn)行了檢測,，并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行了ROC曲線分析。
第三代TRAb檢測在三組對(duì)照中的抑制率臨界值分別為14.5%（a）,、22.0%（b）和22.0%（c）,，靈敏度均為99.6%，特異性分別為99.6%（a）,、96.6%（b）和97.5%（c）（圖2）,。
圖2 三代TRAb不同對(duì)照組間ROC曲線。a:疾病組+對(duì)照組1,；b：疾病組+對(duì)照組2,；c:疾病組+對(duì)照組3。
根據(jù)結(jié)果建議三代TRAb抑制率臨界值為15%,。
二代和三代TRAb檢測對(duì)比
在15%的臨界值下,，第三代TRAb對(duì)于新診斷GD、PT和SAT患者的血清樣本靈敏度和準(zhǔn)確性與第二代相比如表1所示,，數(shù)值分布如圖3所示,。
圖3 二代與三代TRAb在不同患者組間檢測數(shù)值分布圖
注：a組為三代TRAb分別在GD、PT以及SAT三組間檢測值分布,；b組為二代TRAb在三組間分布,。
在244例未經(jīng)治療的Graves病患者中，三代檢測與二代檢測結(jié)果高度相關(guān)（r=0.911）,，但三代檢測（243例,，99.6%）的抗體陽性率高于二代檢測（242例，99.2%）,。在對(duì)照組中,，三代檢測在9.2%的PT組和6.7%的亞急性甲狀腺炎（SAT）組中檢出抗體,；二代檢測在16.8%的PT組和13.3%的SAT組中檢出抗體。
表1 二代與三代TRAb在三個(gè)疾病組間陽性率的比較
綜合來看,，三代TRAb在GD組檢出率更高,，PT組和SAT組檢出率更低，整體性能更優(yōu),。與二代檢測相比,，三代檢測對(duì)GD和PT的診斷準(zhǔn)確性顯著提高（p=0.0026）。
圖4 二代與三代TRAb間結(jié)果相關(guān)性比較,。橫軸為三代TRAb,，縱軸為二代TRAb。
討論
甲狀腺功能亢進(jìn)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)差異較大,。在日本等碘攝入量高的國家及地區(qū),，大多數(shù)甲狀腺毒癥病例是由GD和PT引起的，而在碘攝入量低的地區(qū),，GD和毒性多結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是甲狀腺功能亢進(jìn)的常見原因[4],。在目前的臨床實(shí)踐中，需要在甲狀腺毒癥患者中檢測TRAb以鑒別GD患者,。在本研究中,，我們證實(shí)了基于M22-生物素競爭抑制的ELISA方法（三代TRAb）在診斷GD以及鑒別GD和PT引起的甲狀腺毒癥患者方面的高靈敏度。
我們的結(jié)果最終表明，在患有GD和PT的甲亢患者中,，基于M22第三代TRAb檢測的準(zhǔn)確性為96.7%,，顯著優(yōu)于第二代TRAb準(zhǔn)確性為93.9%（p=0.0026）。尤其是在GD和PT患者的鑒別診斷上,，三代檢測性能顯著優(yōu)于二代,。新方法的在預(yù)測停藥后GD的預(yù)后情況，以及自身抗體與Graves眼病的關(guān)系上的臨床價(jià)值有待進(jìn)一步發(fā)掘,。
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參考文獻(xiàn)：Kamijo K , Ishikawa K , Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.