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RSR AQP4Ab 抗體檢測(cè)試劑盒是世界上在該項(xiàng)目上同時(shí)獲得CE和美國(guó)FDA認(rèn)證的產(chǎn)品,，F(xiàn)DA 510(K）注冊(cè)編號(hào)：K161951,； 中國(guó)CFDA注冊(cè)受理號(hào)：JSZ1800016

1.檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

(1)請(qǐng)確保試劑盒在使用前已在室溫環(huán)境下(20-25℃)回溫,。

(2)核準(zhǔn)本次檢測(cè)涉及樣品數(shù)，規(guī)劃好板面布局,。

(3)使用剪刀或其他物品打開(kāi)試劑盒內(nèi)微孔板的鋁箔包裝,，取出微孔板，將本次檢測(cè)不涉

及的多余板條卸除,，妥善放回鋁箔包中,。鋁箔包內(nèi)應(yīng)放置隨裝的干燥劑并以膠帶封好開(kāi)口，裝回自封袋中隨試劑盒冷藏保存,。

(4)對(duì)空白孔做好標(biāo)記,。

(5)取出試劑盒內(nèi)的濃縮洗液(concentrated wash solution)，以純水十倍稀釋濃縮液,?？偭扛?/span>

據(jù)樣品數(shù)決定，手工洗板一般用量為500mL/半板,。

(6)準(zhǔn)備一塊ELISA 微孔板蓋或若干ELISA 板封口膜,。

(7)觀察樣品性狀。新鮮血清或凍存血清應(yīng)在室溫下保持澄清,，如發(fā)現(xiàn)渾濁或溶血請(qǐng)?jiān)?/span>

13000RPM 下離心5 分鐘,，并在接下來(lái)的檢測(cè)中只使用澄清部分。

2.檢測(cè)流程

(1)取出試劑盒內(nèi)的AQP4-生物素(AQP4-biotin)和復(fù)溶緩沖液(reconstitution buffer),，每瓶?jī)?/span>

干粉使用移液器加入1.5ml 復(fù)溶緩沖液復(fù)溶,。復(fù)溶瓶數(shù)根據(jù)本次檢測(cè)樣品量決定，每瓶生

物素可供50-55 孔使用,，單次未使用完的已溶解生物素可在2-8℃中存放3 天,。

(2)使用移液器向每孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品(Calibrator)，對(duì)照品(Negative control&Positive

control)以及患者血清50uL,。加樣順序中建議標(biāo)準(zhǔn)品按照先陰性質(zhì)控品,、后標(biāo)準(zhǔn)品由低到

高順序加樣。

(3)除空白孔外使用移液器向每孔中加入25ul 復(fù)溶的AQP4-生物素

(4)完成加樣后蓋好微孔板蓋,，將微孔板放置于酶標(biāo)板水平搖床上,，按500 次/分鐘頻率振

蕩總計(jì)兩小時(shí)。

(5)取出試劑盒內(nèi)的鏈霉親和素過(guò)氧化物酶(SA-POD)和稀釋液(diluent for SA-POD),，按

照每0.1mlSA-POD 需加1.9ml 稀釋液進(jìn)行二十倍稀釋,。一般情況下完成整板檢測(cè)需用

0.6mlSA-POD 與11.4ml 稀釋液。推薦使用單獨(dú)容器盛放稀釋后的SA-POD,，非特殊情況不

推薦在SA-POD 瓶?jī)?nèi)直接稀釋,。

(6)完成孵育后將微孔板取下，打開(kāi)板蓋,，采取快速翻轉(zhuǎn)的方式將孔內(nèi)液體拍凈,。使用洗

瓶/多道移液器/洗板機(jī)抽取稀釋完成的洗液進(jìn)行洗板,，每孔洗滌三次。完成后將微孔板倒

扣在吸水紙上拍打以除去多余洗液,。若采用自動(dòng)洗板機(jī)則可設(shè)定抽取量1mL,，加液量

300uL，振蕩3-5 秒,，洗滌次數(shù)為3.

(7)除空白孔外每孔中加入稀釋好的SA-POD 100ul,。蓋好板蓋室溫使用水平搖床500 次/分

振蕩20 分鐘。

(8)重復(fù)步驟6.如采用手工洗板,，完成三次洗液洗板后追加一次純水洗板,，用以除去泡沫。

(9)請(qǐng)注意:此步驟中包含空白孔,。

使用移液器向每孔中加入100ul 顯色底物(TMB,，棕色瓶)，在避光處放置20 分鐘,，請(qǐng)勿

振蕩,。

(10)此步驟中包含空白孔。使用移液器向每孔中加入100ul 終止液(stop solution),，可觀察

到顯藍(lán)色的微孔變?yōu)榱咙S,。

(11)蓋好板蓋，使用水平搖床或手工振蕩微孔5 秒,，保證微孔內(nèi)顯色過(guò)程充分停止,。

3.讀數(shù)及數(shù)據(jù)處理

(1)讀數(shù)儀器的調(diào)整

檢測(cè)讀數(shù)需使用具有讀取特定波長(zhǎng)的吸光度功能的儀器。推薦使用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀或具備

450nm 及405nm 濾光片的酶標(biāo)儀,；本實(shí)驗(yàn)推薦在檢測(cè)步驟9 時(shí)打開(kāi)儀器預(yù)熱,，以取得穩(wěn)

定的波長(zhǎng)利于讀數(shù)。

(2)讀取吸光度

打開(kāi)計(jì)算機(jī),，在控制軟件中打開(kāi)已準(zhǔn)備好的讀板方案,，在板面布局中按照本次檢測(cè)樣品數(shù)

目更改樣品布局,。完成設(shè)定后點(diǎn)擊”Read”開(kāi)始讀板,。

(3)完成讀數(shù)后將結(jié)果按讀板方案中的報(bào)告單模板輸出至LIS 系統(tǒng)，打印報(bào)告單,。

4.檢測(cè)后工作

(1)讀數(shù)完畢的微孔板應(yīng)小心拆下已使用的板條,，請(qǐng)勿將孔內(nèi)液體濺出。將已使用的板條

按醫(yī)療廢物處理,。

(2)空板架使用*或其他方式妥善清潔后保存,，推薦放回試劑盒微孔板的自封袋內(nèi)。

(3)本次檢測(cè)未使用干凈的復(fù)溶生物素及稀釋的SA-POD 可留作下次檢測(cè)使用,，隨試劑盒其

他成分一并冷藏(2-8℃)貯存,。

(4)洗液及濃縮洗液推薦冷藏貯存,。