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重癥肌無力自身抗體檢測
閱讀：2807 發(fā)布時間：2018-5-23重癥肌無力（Myasthenia gravis，MG）是一種由神經-肌肉接頭處傳遞功能障礙所引起的自身免疫性疾病,，臨床主要表現(xiàn)為部分或全身骨骼肌無力和易疲勞,，活動后癥狀加重，經休息后癥狀減輕,。患病率為77~150/100萬,，女性患病率大于男性，比例約3：2,，各年齡段均有發(fā)病,，兒童1~5歲居多,?？贵w檢測對重癥肌無力的診斷具有重要的意義。
（一）乙酰膽堿受體抗體（AChRAb）檢測
患者體內自身免疫反應產生的乙酰膽堿受體抗體（Acetylcholine receptor autoantibodies,，AChRAb）可作用于神經-肌肉接頭處的乙酰膽堿受體,，從而導致傳遞功能障礙，引發(fā)重癥肌無力,。因此,，AChRAb是診斷重癥肌無力的重要標志物。
RSR AChRAb檢測原理：
人血清中的乙酰膽堿受體抗體與不同的AChR單克隆抗體（MAb1,、MAb2,、MAb3）競爭相似的AChR結合位點。當樣本中不存在AChR抗體時,，形成MAb1- AChR-MAb2-/MAb3-生物素復合物,，通過加入鏈霉素過氧化物酶及其顯色底物，檢測已結合在微孔板中的AChR,。在波長450nm處讀取吸光值,。當樣本中存在AChR抗體時，MAb1- AChR-MAb2-/MAb3-生物素復合物的形成受到抑制,，導致SA-POD結合量減少,，zui終反應物在450nm吸光度減少。待測血清中AChRAb濃度越高,，抑制MAb-生物素結合的作用越明顯,。
檢測流程:
試劑盒特點:
*ELISA法定量檢測乙酰膽堿受體抗體。
靈敏度：92%，于83例重癥肌無力病的患者血清樣本,。
特異性：100%,，于302例健康志愿者的血清。
標準品范圍：0.5 – 20 nmol/L
臨界值：陰性: < 0.45 nmol/L; 陽性: ≥ 0.45 nmol/L
zui低檢測限：0.25 nmol/L
適用范圍：于各級醫(yī)院臨檢實驗室使用并可與自動化檢測系統(tǒng)配套使用,。
適用儀器：酶標儀（波長為405nm,、450nm）
樣本要求：100微升人血清，避免使用脂血,、溶血及血漿樣本,。
組分性狀：96孔板，液體和凍干粉,。
儲存條件及有效期：2-8ºC保存,，有效期為9個月。
（二）肌聯(lián)蛋白抗體（Titin Ab）檢測
約80%重癥肌無力患者可檢測到胸腺病變,，在這其中約10%的患者會發(fā)展為胸腺上皮細胞瘤（TET）或胸腺癌,。因此盡早對胸腺瘤做出診斷，并施行胸腺切除術有助于患者取得較好的預后效果,。早在60 年代初Strauss 等就發(fā)現(xiàn)在MG患者血清中存在一種能與骨骼肌橫紋起反應的自身抗體,，其后證明該抗體能與胸腺中的肌樣細胞起反應。
多數(shù)胸腺受影響的患者體內會產生乙酰膽堿受體抗體（AChRAb）,，這個抗體可以用RSR’s AChRAb ELISA 試劑盒檢測診斷重癥肌無力,。同時，患者體內會產生針對條紋肌的自身抗體,，即包含肌聯(lián)蛋白（Titin）抗體,。肌聯(lián)蛋白是條紋肌中具有*分子量的蛋白質。它的主要免疫應答區(qū)位于其中一個分子量為30 kDa的蛋白片段上,。針對這個片段的抗體可能會與乙酰膽堿受體的抗原決定簇進行交叉結合,，即成為副腫瘤綜合癥型重癥肌無力的病因。因此在本產品中使用了重組的肌聯(lián)蛋白片斷（MGT30肽段）作為檢測抗原,，經證實本試劑盒使用的酶聯(lián)免疫檢測法優(yōu)于基于人或猴條紋肌切片的免疫熒光檢測法,。
Titin Ab Elisa操作流程：
（三）肌肉特異性受體酪氨酸激酶抗體（MuSK Ab）檢測
Muscle-specific receptor tyrosine kinas，MuSK Ab）,，是重癥肌無力的又一重要標志物,。因為在重癥肌無力患者中，10%-20%患者血清中檢測不出乙酰膽堿受體抗體,，稱之為血清陰性MG,。但其中約50%的血清陰性MG中可檢測出MuSK 抗體。通過對MuSK抗體的檢測,，可以更全面地輔助診斷重癥肌無力,。RSR MuSK自身抗體檢測試劑盒采用放射免疫法檢測患者血清中MuSK自身抗體,。
MuSK Ab RIA操作流程：
參考文獻：
1. Gilhus NE, Verschuuren JJ. Myasthenia gravis: subgroup classification and therapeutic strategies [J]. Lancet Neurol 2015; 14(10): 1023-1036.
2. Oosterhuis HJ, Limburg PC, Hummel-Tappel E, et al. Anti-acetylcholine receptor antibodies in myasthenia gravis. Part 2. Clinical and serological follow-up of individual patients [J]. J Neurol Sci 1983; 58(3): 371-385.
3.Hewer R, Matthews I, Chen S, McGrath V, Evans M, Roberts E, et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies. Clin Chim Acta 2006;364:159-66.