1,、吸附柱色譜
吸附色譜的原理：在一定條件下，硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用,，這種作用主要是物理和化學(xué)作用兩種.物理作用來自于硅膠表表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力.化學(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用,。
色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住,，管內(nèi)裝入吸附劑,。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果,。除另有規(guī)定外,，通常多采用直徑為0.07～0.15mm的顆粒。色譜柱的大小,，吸附劑的品種和用量,，以及洗脫時的流速，均按各品種項下的規(guī)定,。
2,、分配柱色譜
方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前,，先將載體和固定液混合,，然后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊；供試品可溶于固定液,，混以少量載體,，加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和,，以避免洗脫過程中兩相分配的改變,。
色譜柱的大小規(guī)格由待分離樣品的量和吸附難易程度來決定。一般柱管的直徑為0.5～l0 cm,，長度為直徑的10～40倍,。填充吸附劑的量約為樣品重量的20～50倍，柱體高度應(yīng)占柱管高度的3/4,，柱子過于細長或過于粗短都不好,。
裝柱前，柱子應(yīng)干凈,、干燥,，并垂直固定在鐵架臺上，將少量洗脫劑注入柱內(nèi),，取一小團玻璃毛或脫脂棉用溶劑潤濕后塞入管中,，用一長玻璃棒輕輕送到底部，適當(dāng)搗壓,，趕出棉團中的氣泡,，但不能壓得太緊，以免阻礙溶劑暢流（如管子帶有篩板,，則可省略該步操作）,。再在上面加入一層約0.5 cm厚的潔凈細砂,，從對稱方向輕輕叩擊柱管，使砂面平整,。
常用的裝柱方法有干裝法和濕裝法兩種,。
1、干裝法：在柱內(nèi)裝入2/3溶劑,，在管口上放一漏斗,，打開活塞，讓溶劑慢慢地滴入錐形瓶中,，接著把干吸附劑經(jīng)漏斗以細流狀傾瀉到管柱內(nèi),，同時用套在玻璃棒（或鉛筆等）上的橡皮塞輕輕敲擊管柱，使吸附劑均勻地向下沉降到底部,。
填充完畢后，用滴管吸取少量溶劑把粘附在管壁上的吸附劑顆粒沖入柱內(nèi),，繼續(xù)敲擊管子直到柱體不再下沉為止,。柱面上再加蓋一薄層潔凈細砂，把柱面上液層高度降至0.1～l cm,，再把收集的溶劑反復(fù)循環(huán)通過柱體幾次,，便可得到沉降得較緊密的柱體。
2,、濕裝法：基該方法與干裝法類似,，所不同的是，裝柱前吸附劑需要預(yù)先用溶劑調(diào)成淤漿狀,，在倒入淤漿時,，應(yīng)盡可能連續(xù)均勻地一次完成。如果柱子較大,，應(yīng)事先將吸附劑泡在一定量的溶劑中,，并充分攪拌后過夜（排除氣泡），然后再裝,。
無論是干裝法,，還是濕裝法，裝好的色譜柱應(yīng)是充填均勻,，松緊適宜一致,，沒有氣泡和裂縫，否則會造成洗脫劑流動不規(guī)則而形成“溝流”,，引起色譜帶變形,，影響分離效果。
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