薄層色譜的使用和注意事項
圣賓儀器科技上海有限公司
1、 怎樣提高點樣效率?
點樣是造成TLC定量誤差的主要來源,。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣,；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡,、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大,。為避免不同定量毛細管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管,。但應(yīng)注意更換樣品時,，應(yīng)將毛細管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時,，溶樣溶劑黏度不能過高,，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變,，過高則會改變展開劑組成,；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇,、乙醇,、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1--2cm 底邊距1.5cm,；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm,。
2、展開劑的選擇
TLC與HPLC相比,，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性,。流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成,。流動相強度越大,，溶質(zhì)RF值越大，但很可能降低分離能力,；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物,，根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系,。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì),、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合RF值,，適合的RF值找到后,，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形,，則可看到：三角形頂點是二元體系,，邊是三元體系,，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致,，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成,。這種方法較為直觀，也較簡單,。
3,、TLC的通用顯色方法
理想的顯色希望靈敏度高、斑點顏色穩(wěn)定,、斑點與背景間的對比度好,、斑點的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。在樣品組成并不*已知的情況下,，通用顯色方法顯得成尤為重要,。通用顯色法主要有：
(1)、紫外照射法：方便,，不破壞樣品,；
(2)、碘蒸氣法：通用性強,，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用,；
(3)、熒光試劑：制造熒光背景,，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別,，有熒光物質(zhì)更明顯；
(4),、硫酸溶液：對絕大多數(shù)有機物有效,，但有破壞性。
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