詳細(xì)介紹
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,比如在檢測范圍,、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本,。并可提供免費(fèi)代測,。僅供科研實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
猴亨廷頓蛋白ELISA試劑盒 | HTT ELISA Kit | 48T/96T |
試劑盒組成及試劑配制 :
1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔),。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品),。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶,。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶,。
6. 標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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樣品準(zhǔn)備:
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2)血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶,。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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