詳細介紹
服務:
我們可以根據您的應用需要,比如在檢測范圍,、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本,。并可提供免費代測,。僅供科研實驗。
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
植物L-異天冬氨酸-甲基轉移酶Ⅰ試劑盒ELISA | PIMT1 ELISA Kit | 48T/96T |
試劑盒組成及試劑配制 :
1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔),。
2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品),。
3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶,。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶,。
6. 標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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樣品準備:
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2)血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。酶是一種有機催化劑,,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象,。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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