詳細介紹
綜合微生物的培養(yǎng)方法,,包括以下步驟:
(1)前期準備:(A)滅菌處理,;(B)制備Biolite水,;(C)檢查設(shè)備和材料,;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料,;
(3)導(dǎo)入曝氣,,進行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察,;(a)取液,;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng),;
(5)分離并檢測,;
(6)取液儲存;通過該綜合微生物培養(yǎng)方法簡單可操作性強,,培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內(nèi),,菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
使用范圍:
(1)合成培養(yǎng)基,。合成培養(yǎng)基的各種成分*是已知的各種化學(xué)物質(zhì),。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,組成成分精確,,重復(fù)性強,,而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基,、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等,。
(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細菌,。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,,也難以確定,但配制方便,,營養(yǎng)豐富,,培養(yǎng)效果好,所以常被采用,。
(3)半合成培養(yǎng)基,。在天然有機物的基礎(chǔ)上適當加入已知成分的無機鹽類,或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要。
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好,。若為產(chǎn)酸菌種,,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時間更長,,適用于霉菌,、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存,。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌,、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年,。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā),。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,,可長達10年,。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存,。
載體保存法:①土壤保存法,;②砂土保存法;③硅膠保存法,;④磁珠保存法,;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法,。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃,、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜,。保存時菌液加量不宜過多,,有些可添加保護劑。此外,,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),,再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的,。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存,。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法,。
保藏方法:產(chǎn)品僅供于科研使用
1.傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng),、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等(后者作保藏厭氧細菌用),,培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2. 液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法,,能夠適當延長保藏時間,,它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟,一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡,,另一方面可阻止氧氣進入,,以減弱代謝作用。
3. 載體保藏法
是將微生物吸附在適當?shù)妮d體,,如土壤,、沙子、硅膠,、濾紙上,,而后進行干燥的保藏法,,例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當廣泛。
4. 寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物,,如病毒,、立克次氏體、螺旋體等,,它們必須在生活的動物,、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代,,此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法,。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。
5. 冷凍保藏法
可分低溫冰箱(-20-30℃,,-50-80℃),、干冰酒精快速凍結(jié)(約-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6. 冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度(-70℃左右)下快速冷凍,,然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分(真空干燥),。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液,,以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害,。
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