實(shí)驗內(nèi)容：
1. 稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

培養(yǎng)條件：
1,、營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏 3.0g,，蛋白胨 10.0g,，NaCl 5.0g,，瓊脂 15.0g,，蒸餾水 1.0L,，pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,，則有利于產(chǎn)生芽孢,。pH7.0。121℃,，15min,。
2、需氧類型：好氧
3,、培養(yǎng)溫度：55℃
儀器設(shè)備與器具：
1 恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃,。
2 1000ml三角燒瓶、1ml,、10ml移液管,。
3 接種針。
4 顯微鏡,。
5 超凈工作臺,。
6 玻片,、酒精燈、洗耳球,、試管架,。
7 天平：感量0.01g。
8 滅菌釜,。
9 培養(yǎng)皿（直徑為90mm）,、試管，經(jīng)121℃,、30分鐘滅菌,。
10試管夾,、酒精燈,、秒表、載玻片
菌種的培養(yǎng)：
1,、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料,。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級,。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩,。
2,、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備,，是指菌種在一定條件下,，經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用,。
3,、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4,、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間,。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米,、小米之類的天然培養(yǎng)基）,。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,，于25～28℃培養(yǎng)14天,。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下,，并放入 4℃冰箱中備用,。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右。
6,、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,，作種子罐的種子,。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長,、繁殖成大量菌體,。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等,。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛,、染色深、菌絲粗壯,，無雜菌及異常菌體,。接種量一般在10%～20%。

微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,，如麩皮、豌豆浸汁,、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等,。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％),，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成,。一般情況下,，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,，少數(shù)為37 ℃,，培養(yǎng)時間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備　
霉菌的孢子培養(yǎng),，一般以大米,、小米、玉米,、麩皮,、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基,。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,，可獲得大量的孢子,。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天,。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備　
搖瓶種子進(jìn)罐,，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),，有時母瓶種子也可以直接進(jìn)罐,。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用,，氮源豐富有利于菌絲生長,。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方,。
⑵ 種子罐種子制備　
種子罐種子制備的工藝過程,，因菌種不同而異,，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備,。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子,，把一級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內(nèi),，經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,，稱為三級發(fā)酵,。同樣道理，使用三級種子的發(fā)酵,，稱為四級發(fā)酵,。
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