詳細(xì)介紹
培養(yǎng)條件:
1、營(yíng)養(yǎng)肉汁瓊脂:牛肉膏 3.0g,,蛋白胨 10.0g,,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,,蒸餾水 1.0L,,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,,則有利于產(chǎn)生芽孢,。pH7.0。121℃,,15min,。
2、需氧類型:好氧
3,、培養(yǎng)溫度:55℃
名稱 | 用途 | 貨號(hào) |
僅供于科研使用 | EY-01J10459 |
儀器設(shè)備與器具:
1 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃,。
2 1000ml三角燒瓶、1ml,、10ml移液管,。
3 接種針。
4 顯微鏡,。
5 超凈工作臺(tái),。
6 玻片、酒精燈,、洗耳球,、試管架。
7 天平:感量0.01g,。
8 滅菌釜,。
9 培養(yǎng)皿(直徑為90mm),、試管,經(jīng)121℃,、30分鐘滅菌,。
10試管夾、酒精燈,、秒表,、載玻片
菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料,。菌種分為母種(一級(jí)種),、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,,其篩選步驟包括菌種分離,、初篩和復(fù)篩,。
2,、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,,是指菌種在一定條件下,,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用,。
3,、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4,、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間,。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米,、小米之類的天然培養(yǎng)基),。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,,使水分降至10%以下,,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右,。
6,、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,,作種子罐的種子,。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng),、繁殖成大量菌體,。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等,。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛,、染色深、菌絲粗壯,,無雜菌及異常菌體,。接種量一般在10%~20%。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,,如麩皮、豌豆浸汁,、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等,。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),,碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成,。一般情況下,,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,,少數(shù)為37 ℃,,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),,一般以大米,、小米、玉米,、麩皮,、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天,。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),,有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐,。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng),。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方,。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,,一般可分為一級(jí)種子,、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,,這樣的種子稱為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,,稱為二級(jí)發(fā)酵,。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,,稱為三級(jí)發(fā)酵,。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,,稱為四級(jí)發(fā)酵,。
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β-抑制蛋白1/2
激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b
致癌基因
核受體輔助抑制因子
α1腎上腺素能受體
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溶壁酶干粉1g 液相內(nèi)毒素清除劑100 次
蝸牛酶干粉5g 液相 RNase 清除劑1.5mL
消解酶 ( 溶細(xì)胞酶 ) 干粉100mg 液體蛋白純化回收試劑盒50 次
真菌 DNAout50 次 液體 RNAout50 次
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:
1. 稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌