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ER-Tracker Red( 內質網紅色熒光探針 )20μL DNA 采樣拭子 50 支
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )250μL DNA 包被溶液100mL
Fluo-3，五銨鹽1mg DNA UV 防護劑3g
Fluorescein-5-malei

培養(yǎng)條件：
1,、營養(yǎng)肉汁瓊脂：牛肉膏 3.0g,，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g,，瓊脂 15.0g,，蒸餾水 1.0L，pH7.0,。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,，則有利于產生芽孢,。pH7.0。121℃,，15min,。
2、需氧類型：好氧
3,、培養(yǎng)溫度：55℃

儀器設備與器具：
1 恒溫培養(yǎng)箱：36±1℃,。
2 1000ml三角燒瓶、1ml,、10ml移液管,。
3 接種針。
4 顯微鏡,。
5 超凈工作臺,。
6 玻片、酒精燈,、洗耳球,、試管架。
7 天平：感量0.01g,。
8 滅菌釜,。
9 培養(yǎng)皿（直徑為90mm）、試管,，經121℃,、30分鐘滅菌。
10試管夾,、酒精燈,、秒表、載玻片
菌種的培養(yǎng)：
1,、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料,。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級,。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩,。
2,、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備,，是指菌種在一定條件下,，經過擴大培養(yǎng)成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用,。
3,、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備,。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,，用無菌手續(xù)挑取少許,，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間,。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備,，多數采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）,。
5,、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,，于25～28℃培養(yǎng)14天,。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下,，并放入 4℃冰箱中備用,。一次制得的孢子瓶可在上延續(xù)使用半年左右,。
6,、如果有些菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的,，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽,、生長,、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿）,，及無機鹽(如磷酸鹽)等,。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深,、菌絲粗壯,，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%,。

微生物菌種的培養(yǎng)：
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基中含有一些適合產孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮,、豌豆浸汁,、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％,，氮源不超過0.5％),，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成,。一般情況下,，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數為28 ℃,，少數為37 ℃,，培養(yǎng)時間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備　
霉菌的孢子培養(yǎng),，一般以大米,、小米、玉米,、麩皮,、麥粒等天然農產品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃,，培養(yǎng)時間為4～14天,。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備　
搖瓶種子進罐，常采用母瓶,、子瓶兩級培養(yǎng),，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,，并易被菌體分解利用,，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備　
種子罐種子制備的工藝過程,，因菌種不同而異,，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備,。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,，經培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子,，把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,，稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,，經過培養(yǎng)形成更多的菌絲,，這樣制備的種子稱為二級種子,，將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵，稱為三級發(fā)酵,。同樣道理,，使用三級種子的發(fā)酵，稱為四級發(fā)酵,。

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實驗內容：
1. 稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌