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微生物菌種實驗原理

    霉菌菌絲較粗大,，細胞易收縮變形,，而且孢子很容易飛散,，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片其特點是：(a)細胞不變形,；(b)具有殺菌防腐作用,，且不易干燥，能保持較長時間,；(c)溶液本身呈藍色,，有一定染色效果。

實驗設(shè)備

    無菌吸管,，載玻片,，蓋玻片，U形棒,，解剖刀,，玻璃紙，濾紙等,。

實驗材料

    曲霉（Aspergillussp．）,，青霉（Penicillium sp．）,，根霉（Rhizopus sp．）,，毛霉（Mucor sp．）；

實驗步驟

1．一般觀察法

    于潔凈載玻片上,，滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液,，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細心地將菌絲挑散開,，然后小心地蓋上蓋玻片,，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,，必要時再換高倍鏡,。

2．載玻片觀察法

    (1)將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片,，然后將二個蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端,，蓋上皿蓋，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起,，包扎好,，用1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌,，備用,。

    (2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后,，用無菌解剖刀切成0．5—1cm2的瓊脂塊,，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊,。

    (3)用滅菌的尖細接種針或裝有柄的縫衣針,，取（肉眼方能看見的）一點霉菌孢子,，輕輕點在瓊脂塊的邊緣上,，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上，再蓋上皿蓋,。

    (4)在培養(yǎng)皿的濾紙上,，加無菌的20％甘油數(shù)毫升，至濾紙濕潤即可停加,。將培養(yǎng)皿置28℃培養(yǎng)一定時間后,，取出載玻片置顯微鏡下觀察。

3．玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法

    (1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水,，洗下孢子,，制成孢子懸液。

   (2)用無菌鑷子將已滅菌的,、直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養(yǎng)基平板上,。

   (3)用1ml無菌吸管吸取0．2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上，并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻,。

   (4)微生物菌種置28℃溫室培養(yǎng)48小時后,，取出培養(yǎng)皿，打開皿蓋,，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開,，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上，用顯微鏡觀察,。
*        100克    普通肉湯培養(yǎng)基
*    RT,，避光    10克    菌種保存培養(yǎng)基
*        100克    溶血瓊脂基礎(chǔ)
*    2～8℃,，避光    100克    改良羅氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)
*        100克    碳酸氫鈉瓊脂基礎(chǔ)
*    RT，避光    25克    MiddleBrook 7H11瓊脂
*    RT,，避光    25克    假單胞分離瓊脂
*        100克    液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）
*        25克    霉菌培養(yǎng)基
*        25克    堿性膽鹽瓊脂
微生物菌種