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菌種培養(yǎng)冷凍干燥保藏法
閱讀:110 發(fā)布時間:2017-10-25(1)菌種培養(yǎng)準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃,形狀可用長頸球形底的,,亦稱淚滴型安瓿管,大小要求外徑6—7.5mm,,長105mm,,球部直徑9—11mm,壁厚0.6—1.2mm,。也可用沒有球部的管狀安瓿管,。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,,121.3℃滅菌30分鐘,,備用。
(2)準備菌種,,用冷凍干燥法保藏的菌種,,其保藏期可達數(shù)年至十數(shù)年,為了在許多年后不出差錯,,故所用菌種要特別注意其純度,,即不能有雜菌污染,然后在zui適培養(yǎng)基中用zui適溫度培養(yǎng),,使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物,。細菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期,若用對數(shù)生長期的菌種進行保藏,,其存活率反而降低,。一般,細菌要求24—48小時的培養(yǎng)物,;酵母需培養(yǎng)3天,;形成孢子的微生物則宜保存孢子,;放線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7—10天,。
(3)制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,,制成濃菌液,,每支安瓿管分裝0.2ml。
(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,,價值昂貴,,此處介紹的是簡易方法與裝置,可達到同樣的目的,。
將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,,無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精液或干冰丙酮液,,溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,,只需冷凍4—5分鐘,,即可使懸液結(jié)冰。
(5)真空干燥為在真空干燥時使樣品保持凍結(jié)狀態(tài),,需準備冷凍槽,,槽內(nèi)放碎冰塊與食鹽,混合均勻,,可冷至-15℃,。
抽氣一般若在30分鐘內(nèi)能達到93.3Pa(0.7mmHg)真空度時,則干燥物不致熔化,,以后再繼續(xù)抽氣,,幾小時內(nèi),肉眼可觀察到被干燥物已趨干燥,,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),,保持壓力6—8小時即可。
(6)封口抽真空干燥后,,取出安瓿管,,菌種培養(yǎng)接在封口用的玻璃管上,,可用L形五通管繼續(xù)抽氣,,約10分鐘即可達到26.7Pa(0.2mmHg),。于真空狀態(tài)下,,以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口,。封口以后,,保存于冰箱或室溫暗處,。
苷松新酮 20mg 供鑒別用 111832-201001
6-姜辣素 0.2ml 供含量測定用 111833-201001
1-甲基海因 20mg 供鑒別 111836-201001
安五脂素 20mg 供鑒別用 111844-201001
23-乙酰澤瀉醇B 20mg 含量測定 111846-201001
3,6-二芥子?;崽?nbsp; 20mg 供含量測定 111848-201001
遠志口山酮 20mg 供含量測定 111850-201001
寶藿苷Ⅰ 20mg 供含量測定用 111852-201001
王不留行黃酮苷 20mg 供含量測定用 111853-201001
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖 20mg 供含量測定用 111854-201001
菌種培養(yǎng)