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ATCC菌種轉(zhuǎn)化子有大有小原因分析
閱讀:247 發(fā)布時間:2017-9-27本公司專業(yè)經(jīng)銷代理ATCC菌種,進口試劑,,近日,,我司實驗室經(jīng)常接到客戶這樣的疑問,他們在測試大腸桿菌轉(zhuǎn)化子時,,大腸桿菌轉(zhuǎn)化子有大有小,,結果詭異,想咨詢一下具體原因,。
這情況我遇到過,,尤其菌液PCR時候,有的強有的弱,有的帶大小還不一樣,。我沒有具體研究過啥愿意,,但把大小一樣的那個送去測序,一般都是正確的,。
關于你的這個情況,,我分析【我自己的我也分析過】
1、可能酶產(chǎn)物碎了一些,,這樣連進去就有大有小,。如果你引物用的是在載體上的,那很可能擴出大小不同的,。如果你引物就是在基因上的,,這個好解決,你把退火溫度逐漸提高,,看看是不是那個不同片段就沒了,。
2、有的時候發(fā)生了片段自連【這個看起來好像很可笑,,但其實我發(fā)現(xiàn)只要末端有一個堿基配對,,時間長的話,片段是可以連接到一起的,,這個就跟TA連接實際一樣】,。
3、你的電泳系統(tǒng)有污染,,你把別人的片段給收進去了,,這個我確實證實過,我一批克隆40個基因,,我曾經(jīng)在別的克隆中挑出過另外的基因,。
4、另一種可能,,你T載體上連接的方向問題,,如果酶切不*,可能同樣會造成不同大小片段,,這些如果你量很多的話其實在跑電泳回收時候是分不開的,,但PCR趕巧了,也許就正好擴出來了【這種情況只限于載體上有你用的酶切位點,,而你目的片段上恰恰引入了這連個酶,,這個你可以試著畫個圖看看,把TA連接的正反畫畫】,。
5,、DH好像能長很大的,,也沒關系的,我的有時候就很大點,,其實不用放室溫,,你冰箱4-8℃那層放置1個月,就看出來了,。
6,、所以我覺得這個問題也沒法糾結了。如果你覺得切割實在很難,,ATCC菌種那干脆重新PCR從T載體上擴出來【高保真擴一般也不會突變,,當然TAKARA的primerstar除外】,帶上酶切位點,,然后直接回收酶切連接就可以了,,找到重組子后測序正確在表達就行了不是。
蕓香苷;蕓香葉苷;維生素P;蘆丁蕓香苷;蕓香甙 含量: 進口/國產(chǎn) 蘆丁 20mg/支 英文名稱 Rutin 規(guī)格:
雷公藤內(nèi)酯醇;雷公藤多甙 含量: 進口/國產(chǎn) 雷公藤甲素 20mg/支 英文名稱 Triptolide 規(guī)格:
雷公藤乙素;雷公藤羥內(nèi)酯;雷公藤內(nèi)酯二醇 含量: 進口/國產(chǎn) 雷公藤乙素 20mg/支 英文名稱 Tripdiolide 規(guī)格:
南蛇藤素 含量: 進口/國產(chǎn) 雷公藤紅素 20mg/支 英文名稱 Celastrol 規(guī)格:
雷公藤酯甲 含量: 進口/國產(chǎn) 雷公藤內(nèi)酯甲 20mg/支 英文名稱 Wilforlide A 規(guī)格:
藤黃菌素 含量: 進口/國產(chǎn) 木犀草素 20mg/支 英文名稱 Luteolin 規(guī)格:
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