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公司動態(tài)

微生物菌種的分離培養(yǎng)

閱讀:1022          發(fā)布時間:2017-8-18

一,、微生物菌種實驗原理
 
植物患病組織內(nèi)的真菌菌絲體,,如果給予適宜的環(huán)境條件,,除個別種類外,,一般都能恢復(fù)生長和繁殖,。植物病原菌的分離就是指通過人工培養(yǎng),從染病植物組織中將病原真菌與其它雜菌相分開,,并從寄主植物中分離出來,再將分離到的病原菌于適宜環(huán)境內(nèi)純化,,這個過程總稱植物病菌的分離培養(yǎng),。植物病原真菌的分離一般都是采用組織分離法,就是切取小塊病組織,,經(jīng)表面消毒和滅菌水洗過后,,移到人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
 
二,、實驗?zāi)康?br /> 
植物病原菌的分離培養(yǎng)是植物病理學(xué)實驗zui基本的操作技術(shù)之一,,它對原害鑒定,病原形態(tài)觀察,、植物病害接種體的培養(yǎng)等方面都是經(jīng)常使用的研究手段,。通過本實驗,要求植物病原菌分離培養(yǎng)的一般原則和方法,。
 
三,、實驗材料及準(zhǔn)備
 
1.分離材料:梨黑斑病(Alternaria kikuchiana),,柿樹圓斑?。≒estnlotia sp)及杉木炭疽病(Glomerella cingolata)新發(fā)病的病葉,;楊樹爛皮?。–ytospora chrysosperma)國槐腐爛病(Dothiorella sp.)的帶有新病斑的枝條,;油松種子,。
 
2.分離用具(每小組為單位)
 
酒精燈4個,手術(shù)剪4把,,眼科鑷4把,,PDA培養(yǎng)基3瓶,培養(yǎng)皿(Φ9cm)24套,小燒杯(5ml)4個,,大燒杯1個,,斜面培養(yǎng)基12管,滅菌水4瓶,,5%乳酸瓶(60ml)1個,,火柴1盒,濕,、干紗布各4張,。
 
四、實驗方法及步驟
 
(一)分離前的準(zhǔn)備工作
 
1.工作環(huán)境的清潔和消毒
 
分離培養(yǎng)一般在無菌室,、無菌箱或無菌工作臺(超凈工作臺)上進(jìn)行,,無菌室和無菌箱要經(jīng)過噴霧除塵,并用藥物或紫外線照射消毒(常用消毒為70%酒精,,2%煤酚皂液,,5%石炭酸液等噴霧。若用紫外線燈照射則需20-30分鐘),。在沒有上述設(shè)備條件時,,在清潔房間里關(guān)閉門窗,避免空氣流動,,經(jīng)過噴霧除去空氣及地面灰塵后進(jìn)行操作,,也可獲得較好的結(jié)果。工作前擦凈桌面,,鋪上濕紗布,。將所需用的物品按次序放在工作臺上,避免工作時走動,,工作人員穿上滅菌后的工作服,,帶上口罩,并用肥皂洗手,,用70%酒精或0.1%新潔爾滅擦手,。
 
2.分離用具的消毒
 
凡是和分離材料接觸的器皿(刀、剪,、鑷,、針等)都要隨時(至少在使用時)保持無菌,將這些用具浸于70%酒精中,,使用時在燈焰上滅菌燒去酒精,,如此2-3次(刀、剪,、鑷等不宜在燈焰上燒時過長,,以防退火),。再次使用時必須重復(fù)滅菌。培養(yǎng)皿,、試驗等要經(jīng)過干熱滅菌,。培養(yǎng)基及洗滌或稀釋用蒸餾水都需要事先經(jīng)過高壓蒸氣滅菌。
 
3.微生物菌種分離材料的選擇
 
用新發(fā)病的植株,、器官或組織做為分離材料,,可以減少腐生菌的污染。任何植物壞死部分的內(nèi)部或表面,,都可能有腐生微生物的孽生,,所以一般斑點病害應(yīng)從鄰近健全組織,即從病,、健組織交界處獲得分離材料,。

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