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微生物菌種的保藏方法
閱讀:498 發(fā)布時(shí)間:2017-8-16由于教學(xué)實(shí)驗(yàn)各時(shí)期使用的真菌微生物菌種在數(shù)量及種類上不盡相同,,所以與其相適應(yīng)的培養(yǎng)方法與保管方式亦不相同。大體上分為定期傳代保存法,、超低溫凍結(jié)保存法兩種,。
1、 定期傳代保存法
(1)液體培養(yǎng)基保存法:?jiǎn)渭?xì)胞真菌接種于RPMI 1640培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)24 h,,取出后置4℃冰箱保存,。該方法用于學(xué)期初低溫凍結(jié)菌種的復(fù)蘇、增菌培養(yǎng),。
(2)瓊脂平板培養(yǎng)基保存法:學(xué)期開始,多細(xì)胞凍結(jié)菌種解凍后,,劃線接種于察氏平板培養(yǎng)基上面,,28℃培養(yǎng)7~8 d,,再將培養(yǎng)菌絡(luò)移種于改良馬丁平板培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)7 d,,待培養(yǎng)菌絡(luò)生長(zhǎng)良好,置4℃冰箱保存。為多細(xì)胞真菌的復(fù)蘇與鑒定試驗(yàn),。
(3)瓊脂斜面培養(yǎng)基保存法:?jiǎn)渭?xì)胞真菌由液體培養(yǎng)基中多細(xì)胞真菌從馬丁培養(yǎng)基表面,,分別挑取菌種菌絡(luò),蜿蜒化線接種于各自相對(duì)應(yīng)的瓊脂斜面培養(yǎng)基中,經(jīng)37℃或28℃培養(yǎng)生長(zhǎng)良好后,,置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。該方法用于學(xué)期中,,真菌菌種即將使用,實(shí)驗(yàn)課前的菌種純化和制備階段,。
(4)液體石蠟覆蓋保存法:將無(wú)菌液體石蠟油覆蓋于菌絡(luò)生長(zhǎng)良好的瓊脂斜面真菌培養(yǎng)物表面,,厚度約1 cm左右,置4℃冰箱保存,。該法用于學(xué)期末對(duì)真菌菌種較長(zhǎng)時(shí)期的保存方法,。
2、 液氮超低溫凍結(jié)保存法
將單細(xì)胞或多細(xì)胞真菌培養(yǎng)物,以無(wú)菌生理鹽水洗下并計(jì)數(shù),,加入等量脫脂牛奶保護(hù)劑,,分裝進(jìn)安瓿后封口。選擇菌種不同的適宜冷卻速度,,使瓿內(nèi)菌懸液急速或慢速凍結(jié)成冰,。置液氮超低溫下保存。
各菌種保存方法結(jié)果分析:
(1)液體培養(yǎng)基保存法,,可保存單細(xì)胞真菌15 d左右,。
(2)瓊脂平板培養(yǎng)基保存法,保存多細(xì)胞真菌15 d,。
(3)瓊脂斜面培養(yǎng)基保存法,,保存單細(xì)胞、多細(xì)胞真菌1個(gè)月,。
(4)液體石蠟覆蓋保存法,,可保存真菌菌種6個(gè)月。
(5)液氮超低溫凍結(jié)保存法 可保存凍結(jié)菌種1年,。
一般認(rèn)為,,傳代移種保存法保存的微生物菌種,易失去病原性,,而超低溫保存法能夠完整的保存菌種的致病性,。為此,我們針對(duì)實(shí)驗(yàn)的初,、中,、末3個(gè)時(shí)期,對(duì)菌種的保存選擇不同的保存方法,,優(yōu)化了菌種的遺傳特性不變性,。
anti-HAV 人抗甲型肝炎病毒IgG抗體 規(guī)格: 48T/96T
EMA IgA 人抗肌內(nèi)膜抗體IgA 規(guī)格: 48T/96T
TTN 人抗肌聯(lián)蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AAA 人抗肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
CCP 人抗環(huán)胍氨酸肽抗體 規(guī)格: 48T/96T
RSV 人抗呼吸道合胞病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
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