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微生物檢驗中常用的生化反應(yīng)
閱讀：656 發(fā)布時間：2017-3-221,、微生物菌種糖酵解試驗
不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異,，或能利用或不能利用,，能利用者,，或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣?？捎弥甘緞┘鞍l(fā)酵管檢驗,。
試驗方法：以無菌操作，用接種針或環(huán)移取純培養(yǎng)物少許,，接種于發(fā)酵液體培養(yǎng)基管,，若為半固體培養(yǎng)基，則用接種針作穿刺接種。接種后,，置36±1.0°C培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果,，檢視培養(yǎng)基顏色有無改變（產(chǎn)酸）,，小倒管中有無氣泡，微小氣泡亦為產(chǎn)氣陽性,，若為半固體培養(yǎng)基,，則檢視沿穿刺線和管壁及管底有無微小氣泡，有時還可看出接種菌有無動力,，若有動力,、培養(yǎng)物可呈彌散生長。
本試驗主要是檢查細菌對各種糖,、醇和糖苷等的發(fā)酵能力,，從而進行各種細菌的鑒別，因而每次試驗,，常需同時接種多管,。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫,，溴百里藍和An-drade指示劑,。
2、甲基紅（Methyl Red）試驗
腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖,，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸,，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同,，可產(chǎn)生乳酸,，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物,，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下,，使甲基紅指示劑變紅。
試驗方法：挑取新的待試純培養(yǎng)物少許,，接種于通用培養(yǎng)基,，培養(yǎng)于36±1°C或30°C（以30°C較好）3~5天，從第二天起,，每日取培養(yǎng)液1ml,，加甲基紅指示劑1~2滴，陽性呈鮮紅色,，弱陽性呈淡紅色,，陰性為黃色。迄至發(fā)現(xiàn)陽性或至第5天仍為陰性、即可判定結(jié)果,。
甲基紅為酸性指示劑,，pH范圍為4.4~6.0，其pK值為5.0,。故在pH5.0以下,，隨酸度而增強黃色，在pH5.0以上,，則隨堿度而增強黃色,，在pH5.0或上下接近時，可能變色不夠明顯,，此時應(yīng)延長培養(yǎng)時間,，重復(fù)試驗。
3,、硝酸鹽（Nitrate）還原試驗
有些細菌具有還原硝酸鹽的能力,，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等,。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗,。
試驗方法：臨試前將試劑的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）試液各0.2ml等量混合、取混合試劑約0.1ml,、加于液體培養(yǎng)物或瓊脂斜面培養(yǎng)物表面,，立即或于10min內(nèi)呈現(xiàn)紅色即為試驗陽性，若無紅色出現(xiàn)則為陰性,。
用α-萘胺進行試驗時,，陽性紅色消退很快、故加入后應(yīng)立即判定結(jié)果,。進行試驗時必須有未接種的培養(yǎng)基管作為陰性對照,。α-萘胺具有致癌性、故使用時應(yīng)加注意,。
4,、明膠（Gelatin）液化試驗
有些細菌具有明膠酶（亦稱類蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽,，又進一步水解為氨基酸,，失去凝膠性質(zhì)而液化。
試驗方法：挑取18~24h待試菌培養(yǎng)物,，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度或點種于平板培養(yǎng)基,。于20~22℃培養(yǎng)7~14天。明膠高層亦可培養(yǎng)于36±1℃,。每天觀察結(jié)果,，若因培養(yǎng)溫度高而使明膠本身液化時應(yīng)不加搖動,、靜置冰箱中待其凝固后、再觀察其是否被細菌液化,，如確被液化,，即為試驗陽性。平板試驗結(jié)果的觀察為在培養(yǎng)基平板點種的菌落上滴加試劑,，若為陽性,，10~20min后，菌落周圍應(yīng)出現(xiàn)清晰帶環(huán),。否則為陰性。
5,、尿素酶（Urease）試驗
微生物菌種有些細菌能產(chǎn)生尿素酶,，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨,，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,，酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導(dǎo)酶,，因為不論底物尿素是否存在,，細菌均能合成此酶。其活性zui適pH為7.0,。
試驗方法：挑取18~24h待試菌培養(yǎng)物大量接種于液體培養(yǎng)基管中,，搖均，于36±1℃培養(yǎng)10,，60和120min,，分別觀察結(jié)果?；蛲坎疾⒋┐探臃N于瓊脂斜面,，不要到達底部，留底部作變色對照,。培養(yǎng)2,，4和24h分別觀察結(jié)果，如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天,，作zui終判定,，變?yōu)榉奂t色為陽性。
6,、氧化酶（Oxidase）試驗
氧化酶亦即細胞色素氧化酶,，為細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細胞色素C氧化,，然后此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化,，產(chǎn)生顏色反應(yīng),。
試驗方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或血瓊脂平板菌落上滴加試劑1~2滴，陽性者Kovacs氏試劑呈粉紅色~深紫色,，Ewing氏改進試劑呈藍色,。陰性者無顏色改變。應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)判定試驗結(jié)果,。
7,、硫化氫（H2S）試驗
有些細菌可分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸或含硫化合物，而產(chǎn)生硫化氫氣體,，硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物,。
試驗方法：在含有硫代硫酸鈉等指示劑的培養(yǎng)基中，沿管壁穿刺接種,，于36±1℃培養(yǎng)24~28h,，培養(yǎng)基呈黑色為陽性。陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至6天,。也可用醋酸鉛紙條法：將待試菌接種于一般營養(yǎng)肉湯,，再將醋酸鉛紙條懸掛于培養(yǎng)基上空，以不會被濺濕為適度,；用管塞壓住置36±1℃培養(yǎng)1~6天,。紙條變黑為陽性。
8,、三糖鐵（TSI）瓊脂試驗
試驗方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物,，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培養(yǎng)18~24h,，觀察結(jié)果,。
本試驗可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）,。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃,，但因量少，生成的少量酸,，因接觸空氣而氧化,，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物,，故使斜面后來又變紅,，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化,，所以仍保持黃色,。
9、硫化氫-靛基質(zhì)-動力（SIM）瓊脂試驗
試驗方法：以接種針挑取菌落或純養(yǎng)物穿刺接種約1/2深度,，置36±1℃培養(yǎng)18~24h,，觀察結(jié)果,。培養(yǎng)物呈現(xiàn)黑色為硫化氫陽性，混濁或沿穿刺線向外生長為有動力,，然后加Kovacs氏試劑數(shù)滴于培養(yǎng)表面,，靜置10min，若試劑呈紅色為靛基質(zhì)陽性,。微生物菌種培養(yǎng)基未接種的下部,，可作為對照。