大鼠Ⅱ型肺泡上皮原代細(xì)胞

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織,；肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細(xì)支氣管,，它們的末端膨大成囊,，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡,。小肺泡細(xì)胞,，又稱I型肺泡細(xì)胞，厚約0.1微米,，基底部是基底膜,，無增殖能力。大肺泡細(xì)胞,，又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞,，分泌表面活性物質(zhì)（二棕櫚酰），以降低肺泡表面張力,。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間,，數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小,。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔,。細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)著色淺,、呈泡沫狀,。電鏡下，細(xì)胞游離而有少量微絨毛,，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體,，有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體,。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高,、大小不等,，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)，稱為嗜餓性板層小體,。小體內(nèi)的主要成分為磷脂,，以二棕櫚酰為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等,。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后,，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(zhì)（surfactant）,。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力,、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小,，表面活性物質(zhì)密度增加,，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷,；吸氣時(shí)肺泡擴(kuò)張,，表面活性物質(zhì)密度減小，肺泡回縮力加大,，可防止肺泡過度膨脹,。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏,；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì),。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能,，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用,。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞采用彈性蛋白酶灌注消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。

　?、?消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　　④器官培養(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

129小鼠胚胎干細(xì)胞 The 129 mouse embryonic stem cells  WB-F344(大鼠肝上皮樣干細(xì)胞)     SIAE Others Human 人 sialate O-acetylesterase / SIAE 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液   ALDH4A1 Others Human 豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞 大鼠原代脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

GFP 綠色熒光蛋白 0.5mgGFP 綠色熒光蛋白

CDK2AP2 Protein Human 重組人 CDK2AP2 蛋白

F11R重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CDNF Protein Mouse 重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白

IL1B重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽) Protein

豬胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA 試劑盒

People of cyclooxygenase 2 (COX-2) ELISA Kit 人環(huán)加氧酶2(COX-2)試劑盒

Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAkit 兔型纖溶酶原激活物(uPA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAP13(Humanapelin13)ELISAKit人apelin13

血清樣品樹脂法去內(nèi)毒素試劑盒20次

PorcineIerleukin18,IL-18ELISAKit豬白介素18(IL-18)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人原卟啉原氧化酶(PPOX)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human PPOX (Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit

人堿性唾液脯酸豐富蛋白1(PRB1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human PRB1 (Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit

人叉頭框蛋白C1(FOXC1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human FOXC1 (Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit

人叉頭框蛋白O1(FOXO1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒   Human FOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit

大鼠Ⅱ型肺泡上皮原代細(xì)胞豚鼠白介素1(IL-1)試劑盒 ,，英文名： IL-1 ELISA Kit

Aigen of human non small cell lung cancer (LTA) ELISA Kit 人非小細(xì)胞肺癌抗原(LTA)試劑盒

rabbitEsadiol,E2ELISAKit 兔子雌二醇(E2)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta2-GP1AbIgM(HumanBeta2-Glycoprotein1AibodyIgM)ELISAKit人β2糖蛋白1抗體IgM

細(xì)菌營養(yǎng)肉湯500毫升

rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit兔子內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

PERK(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase 0.5mgPERK(PRKR-like endoplasmic reticulum kinase) 蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗原

CLEC4A重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ADA Protein Human 重組人 ADA / Adenosine deaminase 蛋白 (His 標(biāo)簽)

C Protein Human 重組人 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。(該細(xì)胞傳代次數(shù)有限約 2 代,，建議客戶收到細(xì)胞后盡快安排后續(xù)實(shí)驗(yàn))

1,、取出細(xì)胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜,，放入 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時(shí)，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2,、待細(xì)胞達(dá)到 80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3,、細(xì)胞傳代：

1)吸出細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基,，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中,，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養(yǎng)液終止消化,。

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按 1:2 或 1:3 等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL,，放入 37℃ 5% CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基,。