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產(chǎn)品名稱：人肺微血管內(nèi)皮原代細胞
英文名稱：Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號：GOY-01X0673
分類：人原代細胞

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)內(nèi)：皮細胞樣

人肺微血管內(nèi)皮細胞分離自肺組織,；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔,，左右各一,，覆蓋于心之上。肺有分葉,，左二右三,，共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管,、支氣管等)與喉,、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅,。微血管內(nèi)皮細胞密切參與包括再生,、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應,。細胞呈梭形或多角形,，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內(nèi)皮細胞構成半選擇性屏障,，該屏障對于肺氣體交換,，調節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的人肺微血管內(nèi)皮細胞采用組織貼塊法并結合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的人肺微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

準備DMEM高糖,，10% 優(yōu)質胎牛血清,。

1）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

2）凍存液：90%培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。

2,、細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。

1,、收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。

2、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子等。

3,、用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結果顯示細胞無活力,，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次,。

4,、請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件;建議直接購買提供的培養(yǎng)基,。

5、建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和微生物菌種查詢網(wǎng)技術部溝通交流。

6,、該細胞只能用于科研,，不得用于臨床應用。