雞卵泡顆粒原代細胞

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含F(xiàn)BS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)上皮細胞樣

傳代特性可傳1代

消化液0.25%

雞卵泡顆粒細胞分離自雞卵泡組織,；成熟卵泡是卵巢的組織結(jié)構成分之一,，卵泡腔很大，卵丘很明顯,。卵泡內(nèi)膜細胞緊靠卵泡顆粒層,，與顆粒層細胞之間有一層基膜相隔，內(nèi)膜細胞呈多邊形,，胞質(zhì)清亮,，胞核圓形，細胞間可見許多毛細血管,，外膜細胞位于最外層,，多呈梭形，與周圍結(jié)締組織分界不明顯,。卵泡(follicle)中卵母細胞四周有一層菱形或扁平細胞圍繞,，在卵泡開始發(fā)育、卵細胞成長的同時,，周圍的菱形細胞變?yōu)榱⒎叫?，并由單層增生成復層，因其細胞漿內(nèi)含有顆粒,，故稱為顆粒細胞,。初級卵泡的顆粒細胞為單層；次級卵泡的顆粒細胞增至復層,；成熟卵泡的顆粒細胞展開又變?yōu)閱螌?。顆粒細胞的胞核大而圓，著色深,，細胞的游離面有許多細長突起伸入放射帶的凹陷部,。

方法簡介：

實驗室分離的雞卵泡顆粒細胞采用先機械分離后膠原酶 聯(lián)合消化法、并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的雞卵泡顆粒細胞經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作,。(該細胞傳代次數(shù)有限約 2 代,，建議客戶收到細胞后盡快安排后續(xù)實驗)

1、取出細胞瓶,，75%酒精消毒后拆下封口膜,，放入 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時,，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng),。

3,、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養(yǎng)基，用 PBS 清洗細胞一次,。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中,，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入培養(yǎng)液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按 1:2 或 1:3 等適當?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基,。