乙型肝炎病毒cccDNA PCR測定試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品：小鼠組織金屬抑制因子3(TIMP3)PCR檢測試劑盒 ，英文名： TIMP3
鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA檢測試劑盒Duckviruseeritis,DEVELISAKit 50T
犬乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab
英文名稱Mou

操作流程
收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存,。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)PCR檢測試劑盒 ，英文名： SAA

小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA檢測試劑盒MouseCalretinin,CRELISAKit 50T

人基質(zhì)金屬14(MMP-14)免疫試劑盒 Human Maix Metalloproteinase 14,MMP-14

RatCholecystokinin,CCKELISAKit大鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)PCR檢測試劑盒

10倍PBST濃縮緩沖清理溶液100毫升

MouseCholecystokinin,CCKPCR檢測
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期）,，此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到,，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法：
a,、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）,。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),，若加入內(nèi)標(biāo),，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 ,，英文名： IL-10 ELISA Kit

Mouse compleme 3 (C3) ELISA Kit 小鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠(mouse Lysozyme) 48T/96T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-23(MouseIerleukin23)ELISAKit小鼠白介素23規(guī)格：48T/96T

通用型精(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitTPO大鼠血小板生成素規(guī)格：48T/96T

小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA試劑盒 ，英文名： BTA ELISA Kit

小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA檢測試劑盒MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit 96T/48T

人肺炎衣原體抗體IgA(Cpn-IgA)免疫試劑盒 Human Cpn-IgA ELISA Kit

RatLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

COLLAGENII蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次

Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISA試劑盒小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
乙型肝炎病毒cccDNA PCR測定試劑盒Anti-PDGF-BB/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子-BB抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti- guinea pig IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

死亡受體4抗體 Anti-DR4/APO2/TRAILR1 0.1ml

Rabbit Anti-horse IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FBXO7 英文名稱： F-box蛋白家族FBXO7抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 0酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti- guinea pig IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。