實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

下列相關(guān)產(chǎn)品：
白喉棒桿菌PCR檢測試劑盒 Corynebacterium diphtheriaePCR

極小棒桿菌PCR檢測試劑盒 Corynebacterium minutissimumPCR

假結(jié)核棒桿菌PCR檢測試劑盒 Corynebacterium pseudotuberculosisPCR

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。

定量PCR方法：
a,、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）,。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標,，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
大鼠細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子2(SOCS2)ELISA試劑盒 ，英文名： SOCS2 ELISA Kit

Mouse epithelial neuophil activating peptide 78 (ENA-78/CXCL5) ELISA Kit 小鼠上皮中性粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒

MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HSV-IIgM單皰疹Ⅰ型病毒IgM(捕獲法一步法)

細胞IRAK1活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitLTB4大鼠白三烯B4規(guī)格：48T/96T

小鼠前列腺酸性0酸酶(ACP3)ELISA試劑盒 ,，英文名： ACP3 ELISA Kit

人D受體(VDR)ELISA檢測試劑盒HumanVitaminDReceptor,VDRELISAKit 96T/48T

大鼠脂蛋白脂酶(LPL)免疫試劑盒 Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit

英文名稱HumanNF-kBELISAKit人NF-kB規(guī)格：96T/48T

動物組織羥脯(hydroxyproline)比色法定量檢測試劑盒20次

α-bungarotoxin,α-BGTELISA試劑盒α-銀環(huán)蛇毒素(α-BGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
嗜水氣單胞菌PCR檢測試劑盒Anti-phospho-ERK1(pThr202/pTyr204)/FITC 熒光素標記抗0酸化原活化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti-FITC/Gold 金標記兔抗熒光素 (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml

纖維母細胞生長因子受體1抗體 Anti-FGFR1 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/PE PE標記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

FOXF2 英文名稱： 叉頭蛋白F2抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Stathmin 1 (Ser63) 0酸化原癌基因蛋白18抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-FITC/Gold 金標記兔抗熒光素 (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 2ml