實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結果,。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法,，已得到,，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領域。

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存,。

下列相關產(chǎn)品：
腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒F型探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒PCR檢測試劑盒

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b,、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,，內標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內標,，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
Melamine/BSA 三聚胺與血清白蛋白偶聯(lián)物Multi-class antibodies規(guī)格： 2mg

Anti-CDK6 周期素依賴性激酶6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh O-GlcNAc transferase O位N-乙酰葡萄糖胺OGT抗體 規(guī)格 0.2ml

Amicon Ultra-15離心超濾裝置 蛋白濃縮管(蛋白濃縮過濾器 蛋白濃縮過濾離心管) 個

Tex19A 英文名稱： 表達蛋白19A抗體 0.1ml

CHRNB2 英文名稱： 型乙酰受體B2抗體 0.2ml

Anti-CDK6 周期素依賴性激酶6抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

IgG/Cy5 Cy5標記的驢抗兔IgG 0.1ml

human Fibrinogen： 抗體 0.2ml

肌細胞生長抑制素抗體 anti-GDF-8 0.2ml

Anti-phospho-STAT6(pThr641)/FITC 熒光素標記抗0酸化信號轉導和轉錄激活因子6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-Smad3(Ser204) 0酸化細胞信號轉導分子SMAD3抗體 規(guī)格 0.1ml

IgG 小鼠抗大鼠IgG (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
辛德畢斯病毒PCR檢測試劑盒小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒 ,，英文名： -4 ELISA Kit

小鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA檢測試劑盒Mouseierleukin12,IL-12/P40ELISAKIT 96T/48T

人肝細胞生長因子(HGF)免疫試劑盒 Human HGF ELISA kit

RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BMGY培養(yǎng)基100/500毫升

MouseIerleukin1β,IL-1βELISA試劑盒小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T