操作流程
收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測(cè)序——>測(cè)序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫(kù)——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
腺伴隨病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒A型探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒B型探針法熒光定量PCR試劑盒

腺病毒C型探針法熒光定量PCR試劑盒
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期）,，此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到，廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域,。
定量PCR方法：
a,、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板,。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）,。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù),。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),，若加入內(nèi)標(biāo),，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand) 壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡素2配體抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Camk1g 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PDEF/SPDEF 上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格 0.1ml

Actin,Skeletal Muscle 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

TEX261 英文名稱： TEX261蛋白抗體 0.2ml

Cecropin 英文名稱： 殺菌肽/天蠶抗菌肽抗體 0.2ml

Anti-Camk1g 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的驢抗兔IgG 0.1ml

Phospho-FAK (Tyr925)： 0酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml

膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體 Anti-GDNF 0.1ml

Anti-phospho-Src(pTyr529)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化Src原癌基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Smad2(Thr220) 0酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 規(guī)格 0.1ml

IgM 小鼠抗大鼠IgM (親和層析化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
辛諾柏病毒PCR檢測(cè)試劑盒小鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒 ,，英文名： ADM ELISA Kit

小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousehepatocytegrowthfactor,HGFELISAkit 96T/48T

人肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)免疫試劑盒 Human hepatic iglyceride lipase,HTGL ELISA Kit

RatHexokinase,HKELISAKit大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BLOTTO10核酸雜交封閉溶液100毫升

MouseIerleukin15,IL-15ELISA試劑盒小鼠白介素15(IL-15)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。