操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
犬布魯氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

犬布氏桿菌PCR檢測試劑盒

犬惡絲蟲（心絲蟲）探針法熒光定量PCR試劑盒

犬附紅細胞體（犬嗜血支原體）探針法熒光定量PCR試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法，已得到,，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記，下游引物不標記,。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
IL-3 大鼠白介素-3Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-TNFRSF12A 壞死因子配體超家族成員12A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NEK2 中心體相關(guān)蛋白激酶Nek2抗體 規(guī)格 0.2ml

Human glycosylated serum protein,GSP ELISA Kit 人糖化蛋白 96T

TMEM59L 英文名稱： 跨膜蛋白59樣蛋白抗體 0.2ml

C7orf25 英文名稱： 7號染色體開放閱讀框25抗體 0.2ml

Anti-TNFRSF12A 壞死因子配體超家族成員12A抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

IgG ascites 小鼠抗兔IgG腹水 1ml

FHOD1： 肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體 0.2ml

整合素α4β7抗體 Anti-Integrin α4β7/LPAM-1 0.1ml

Anti-Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) /FITC 熒光素標記0酸化突觸后密度蛋白95抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-PRKCQ(Thr538) 0酸化蛋白激酶C theta抗體 規(guī)格 0.1ml

IgG Whole serum 驢抗羊IgG抗血清Multi-class antibodies規(guī)格： 1ml
豬腸病毒PCR檢測試劑盒小鼠天門冬酸基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 ，英文名： AST ELISA Kit

小鼠白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒MouseIerleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T

人骨形成蛋白4(BMP4)免疫試劑盒 Human BMP4 ELISA Kit

RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKiatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit大鼠IX(FIX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

751型分光光度儀1毫升1厘米光徑玻璃比色皿1個

MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISA試劑盒小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。